论文部分内容阅读
研究目的:肾上腺皮质癌是一种罕见且恶性程度极高的恶性肿瘤,其发病率约1/100万,发病机理尚未明确。大约2/3的患者发现肿瘤时已局部侵润或远处转移,临床治疗效果差,预后差。IGFs是近年来肿瘤研究一大热点,与多种肿瘤的发生、发展、进展及预后有密切关系。本研究旨在评价肾上腺皮质癌与IGFs的关系,冀希望通过本研究达到以下目的:1、通过对SW-13细胞株体外培养了解SW-13细胞株的生物学行为及生物学特性;2、通过IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及anti-IGF-IR对SW-13细胞体外培养的干预,探讨其对SW-13细胞株生长及凋亡的调控。3、探讨以IGFs为新的治疗靶点用于治疗肾上腺皮质癌的可能。材料与方法:1、材料:苏州净化设备厂产SA-ⅡA生物安全台;Napco5410型CO2细胞培养箱;biocell产ht2型酶标仪;尼康E-600光学显微镜;日立H-600透视电镜;HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统;Sigma公司提供L-15培养基干粉、分装噻唑氮蓝(MTT)、分装二甲亚砜(DMSO)、胰蛋白酶;杭州四季青生物制品有限公司提供胎牛血清。SW-13细胞株由上海中科院细胞库提供。R&D公司提供人重组Ⅰ型胰岛素样生长因子(rhIGF-Ⅰ)、人重组Ⅱ型胰岛素样生长因子(rhIGF-Ⅱ)、人胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体(anti-IGF-IR);Roche公司提供原位凋亡检测试剂盒。2、SW-13细胞株进行体外培养,MTT法检测其生长曲线,电镜下、光镜下进行细胞形态学观察。3、采用MTT法描绘不同浓度胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体作用后SW-13细胞株体外培养生长的促进及抑制的效应-浓度曲线,并比较不同浓度的胰岛素样生长因子和其Ⅰ型受体抗体组及单一胰岛素样生长因子或其Ⅰ型受体抗体组与阴性对照组之间差异。4、原位凋亡(TUNEL)法检测胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体单独或联合作用于SW-13细胞后细胞凋亡情况,同时观察细胞形态及数量变化。结果:1、细胞需在37℃,无CO2,偏碱性环境下培养,6-8h完全贴壁,2d左右进入对数生长期。细胞生物学性状稳定。2、胰岛素样生长因子能明显促进SW-13细胞增殖,其作用效果与作用浓度在一定浓度范围内呈正相关(P<0.05);而胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体能抑制胰岛素样生长因子对SW-13细胞刺激作用,并且对SW-13细胞的增殖亦有直接抑制作用(P<0.05)。3、胰岛素样生长因子能明显抑制SW-13细胞凋亡,而胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体能促进SW-13细胞凋亡,而胰岛素样生长因子主要通过胰岛素样生长因子Ⅰ型受体发挥其抑制SW-13细胞凋亡的生物学作用。结论:1、SW-13细胞株是一种生物学特性稳定、实用的细胞株。2、胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株生长,这种作用主要通过胰岛素样生长因子Ⅰ型受体介导。3、胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株生长,与其抑制细胞凋亡有关。这种生物学作用亦通过胰岛素样生长因子Ⅰ型受体介导,胰岛素样生长因子Ⅰ型受体抗体可明显抑制这种生物学作用。