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诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cell, iPSC)是通过将外源多能因子导入到已分化的细胞中,促进多能基因表达,使细胞重编程而获得多能性的一类细胞。iPSC与ESC (Embryonic Stem Cell)类似,具有分化成各种类型细胞和三个胚层的潜能。相比分离胚胎干细胞牺牲胚胎的局限性,iPS技术可以诱导多种来源的细胞,给研究人员提供了更多的研究材料,并规避了破坏胚胎等伦理问题。iPSC技术应用在禽类物种上,可以促进珍稀鸟类和优良种禽的保种育种。本论文研究主要从广西三黄鸡体细胞出发诱导iPSC,并优化iPSC的培养系统,为建立一套以干细胞为基础的家禽保种育种平台奠定基础。研究主要分为三部分,分别为分离三黄鸡体细胞、诱导重编程三黄鸡胚成纤维细胞、鸡iPSC的培养条件的优化,结果如下：(1)三黄鸡体细胞分离。本实验分离三黄鸡幼鸡羽毛细胞,采用不同种类培养液、胰蛋白酶不同时间消化、不同浓度血清培养液分离培养羽毛细胞。发现胰蛋白酶消化10分钟,DMEM/F12培养液培养可以分离到羽毛细胞,但羽毛细胞传代后增殖速度减慢趋向死亡。分离并得到三黄鸡幼鸡心、肝、肌肉组织、鸡胚成纤维细胞。(2)三黄鸡胚成纤维细胞诱导重编程。采用含有Oct4、Sox2、Klf4 Lin28、c-Myc多能转录因子Piggybac转座子脂质体法转染CEF细胞,转染培养10天后没有出现细胞克隆。使用含有不同Sox2、Lin28、Oct4、Nanog、c-Myc和Klf-4多能因子组合的慢病毒载体感染CEF细胞,发现Sox2、Lin28、 Oct4、Nanog组合,Sox2、Oct4、c-Myc、Klf-4组合均可实现细胞重编程,诱导出碱性磷酸酶阳性克隆。(3)鸡iPSC的培养系统的优化。通过配制不同营养成分的培养液,改变培养液中添加BRL条件培养液比例、FGF浓度、LIF浓度,对比BRL、STO、MEF饲养层,对比昆明小鼠和ICR小鼠MEF饲养层,对比丝裂霉素C处理和物理辐射处理MEF饲养层,培养并观察鸡iPSC的生长状态。实验结果发现ICR小鼠MEF细胞经丝裂霉素C处理制备饲养层适合鸡iPSC生长,ICR小鼠MEF细胞经Y射线辐射处理制备饲养层需要在培养液中添加4-10ng/ml LIF才能维持iPSC的生长,KM小鼠MEF细胞经丝裂霉素C处理和Y射线辐射处理制备饲养层不适合在本实验培养体系中培养iPSC。综上作述,本研究分离获得了三黄鸡体细胞并实现诱导重编程,优化了鸡iPSC的培养条件,保持细胞良好的生长状态,为利用iPSC技术开展地方优质珍稀家禽品种的保种育种奠定了基础。。