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目的 评价E-钙黏附素(E-CD)mRNA在胃癌原发灶、淋巴结转移灶、腹腔液中的表达水平及其与胃癌生物学行为和腹膜转移相关因素的关系。 方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR法)对35例胃癌手术切除的新鲜组织(胃癌旁正常黏膜、胃癌原发灶、转移淋巴结、腹腔液)进行了E-CD mRNA水平的检测，并与胃癌的生物学行为和腹膜转移相关因素进行比较。其中原发灶及取材转移淋巴结均经常规病理证实。每例标本均进行系统病理学检查。实验过程包括：①组织标本的收集：每例均留取切缘处癌旁正常黏膜、胃癌原发灶、转移淋巴结，用锡箔纸包好，液氮速冻，然后置-80℃保存，其中淋巴结一分为二，一份-80℃保存，另一份10％甲醛溶液固定，用于制作常规病理切片；腹腔液的收集：术中开腹后，于患者直肠-膀胱陷凹(女性为直肠-子宫陷凹)置入一根导尿管，注入无菌生理盐水100ml，轻轻搅拌后抽出，将其中20ml左右送细胞病理室进行PLC检查，剩余部分在低温离心机中，以2000转／分离心10分钟，沉渣用于提取总RNA。②总RNA的提取：将组织块液氮速冻，击碎，加入0.16ml TRIZOL试剂，参照试剂说明书进行RNA提取；腹腔液沉渣直接加入TRIZOL试剂，方法同实体组织。③逆转录反应：将提取的RNA逆转录成cDNA。④PCR扩增：以cDNA为模板，选择相应的引物，扩增E-CD基因片段，以β-ac- tin作为内对照，E－CD扩增 片段为467hp，p－actin扩增 片段为 152hp。⑤PCR产物的检测和半定量：取PCR产物进行琼脂糖凝 胶电泳，摄下并保存电泳图像，采用Gel work－ID软件，对电泳图 像中的E－CD和内对照p－actin的扩增产物条带分别进行光密 度值的分析，对目的基因的表达进行半定量。⑤统计学分析：采用 方差分析和t检验进行统计学分析。 结 果 1．胃癌组织中 E－CD mRNA的表达：胃癌旁正常满膜及胃 癌组织均表达E－CD mRNA。癌旁正常薄膜及胃癌组织中E－ CD mRNA表达平均指数分别为1．067土o．09和O．8 17。O．091， 胃癌组织表达指数明显低于癌旁正常新膜（P＜0．01人在浸润型。 未分化型、弥漫生长、侵透浆膜、Lauren分型为弥漫型组，胃癌组织 E－CD m＊＊A表达明显减弱（P＜O．05－0．01）；按转移淋巴结新 TNM分期，随着转移淋巴结数增加以及TNM分期为皿、IV期者表 达指数均明显降低瞩＜0．05－0、．of人 2．胃癌淋巴结转移灶、原发灶E－CD mRNA表达差异与胃 癌恶性表型的关系：分化型、未分化型转移淋巴结表达指数比较无 统计学意义；全组转移淋巴结的平均表达指数明显高于胃癌原发 灶；转移淋巴结与相应癌组织E－CD mRNA表达差值在浸润型。 未分化型、弥漫状生长、侵透浆膜、Lauren分型为弥漫型组明显增 高沙＜0．05－0．0 U。按新 TNM分期随转移淋巴结个数增加及 ＊＊M分期为皿 ＊期组，表达的差值也显著增高（P＜O．05－o． 01）。 3．胃癌腹腔液中E－CD mRNA的表达：在35例腹腔液中均 表达 E－CD mRNA；在胃癌侵透浆膜、PLC阳性组表达均明显增高乙”瞩＜O．01人在浆膜类型中，正常十反应型与结节性相比，差异元 ·2·显著性，而腾状型十多彩型表达指数明显高于前两者，差异有非常显著意义。 结 论 1．胃癌原发灶E－CD mRNA表达水平降低，且其表达水平与胃癌的恶性生物学行为呈正相关。 2．胃癌淋巴结转移灶存在E－CD mRNA的再表达，且再表达能力与胃癌的恶性生物学行为呈负相关。 3．胃癌腹膜转移也存在着E－CD mRNA的再表达，但腹腔液E－CD mRNA检测对腹腔脱落癌细胞的检出不具有特异性。