【摘 要】
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目的:本文旨在研究FDFT1在HIV-1 Tat蛋白调控人类疱疹病毒8型复制周期中的作用,明确HIV-1 Tat蛋白是否通过调控FDFT1来参与HHV-8复制周期调控,为阐明FDFT1在艾滋病相关型卡波济肉瘤的发生与发展中的作用提供部分依据。方法:（1）通过包装获取Tat重组慢病毒感染BCBL-1细胞,利用RT-q PCR检测Tat、FDFT1、ORF73、ORF50的m RNA表达,同时通过We
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目的:本文旨在研究FDFT1在HIV-1 Tat蛋白调控人类疱疹病毒8型复制周期中的作用,明确HIV-1 Tat蛋白是否通过调控FDFT1来参与HHV-8复制周期调控,为阐明FDFT1在艾滋病相关型卡波济肉瘤的发生与发展中的作用提供部分依据。方法:（1）通过包装获取Tat重组慢病毒感染BCBL-1细胞,利用RT-q PCR检测Tat、FDFT1、ORF73、ORF50的m RNA表达,同时通过Western blot检测检测Tat、FDFT1蛋白表达;（2）以慢病毒为载体构建p CDH-GFP-FDFT1重组慢病毒质粒,通过菌落PCR、质粒双酶切及序列测定对重组质粒进行验证,然后通过三质粒共转染293T细胞获取病毒颗粒,并通过感染293T细胞,利用RT-q PCR验证FDFT1基因表达;将FDFT1过表达重组慢病毒感染BCBL-1细胞,采用RT-q PCR及Western blot检测FDFT1的m RNA和蛋白表达,同时利用RT-q PCR检测ORF73、ORF50的m RNA表达。结果:（1）使用Tat重组慢病毒感染BCBL-1细胞后,最佳感染时间为96 h,最佳感染体积为200μl,通过RT-q PCR检测到FDFT1、ORF73的m RNA表达量相对下调,而ORF50的m RNA表达量呈上调趋势,同时通过Western blot做进一步验证,能检测到Tat蛋白表达升高,而FDFT1蛋白表达下降,差异有统计学意义;（2）菌落PCR及质粒双酶切结果说明目的基因成功插入载体质粒,测序结果重组质粒中FDFT1基因与NCBI中登记的相应基因同源,说明构建的目的载体质粒序列正确。利用构建成功的p CDH-GFP-FDFT1质粒包装为慢病毒后感染293T细胞,可检测到细胞中FDFT1基因表达与对照病毒感染相比升高15.13倍,说明构建成功的慢病毒载体能过表达FDFT1目的基因。使用FDFT1过表达重组慢病毒感染BCBL-1细胞后,最佳感染时间为96 h,最佳感染体积为300μl,通过RT-q PCR及Western blot能检测到FDFT1的m RNA及蛋白表达上调,同时利用RT-q PCR检测到ORF73的m RNA表达量相对于阴性对照组呈上调趋势,而ORF50的m RNA表达相对下调,差异有统计学意义。结论:（1）利用包装获取的Tat慢病毒感染BCBL-1细胞并表达Tat后,FDFT1、ORF73的m RNA表达水平下降,而ORF50的m RNA表达上调,推测HIV-1Tat蛋白可能通过抑制FDFT1表达来参与HHV-8裂解复制周期调控;（2）利用包装获取的FDFT1慢病毒感染BCBL-1细胞并表达FDFT1后,ORF73的m RNA表达水平上调,而ORF50的m RNA表达下调,结果表明FDFT1参与HHV-8裂解复制周期调控。
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