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目的:探讨长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)H19与S-腺苷高半胱氨酸水解酶(S-adenosylhomocysteine hydrolase,SAHH)相互作用调控8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1)甲基化水平在苯并[a]芘(Benzo[a]pyrene,Ba P)致人肺源性细胞(16HBE、BEAS-2B、VA13)DNA氧化损伤过程中的作用,以期为揭示Ba P暴露致DNA损伤的表观遗传调控机制提供相应线索。方法:通过si RNA技术降低人肺源性细胞中H19及SAHH的表达水平,构建H19低表达、SAHH低表达和H19及SAHH双低表达细胞模型,同时设置转染阴性序列对照组;通过质粒转染技术(载体p CMV-GV141)过表达人肺源性细胞中SAHH的表达水平,构建SAHH过表达细胞模型(wild type(WT)-SAHH、M1-SAHH,M2-SAHH,M3-SAHH),同时设置转染空质粒对照组。用不同浓度Ba P(0、1、2、4、8、16、32μmol/L)染毒24h,以16μmol/L Ba P染毒不同时间(0、1、2、4、8、12、24h),同时均设置二甲基亚砜(Dimathyl sulfoxide,DMSO)溶剂对照组。用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测H19的表达水平。采用lnc RNA荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)结合免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)检测H19的分布及其与SAHH的共定位。使用RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)检测H19与SAHH的相互作用。通过免疫印迹试验(Western Blot)和荧光分光光度分析法(Fluorometric)检测SAHH蛋白的表达和活性水平。使用焦磷酸测序法(Pyrosequencing)检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1)甲基化水平。用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHd G)的含量,分析Ba P染毒后细胞DNA氧化损伤的情况。采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)分析细胞周期。结果:随着染毒浓度和时间的增加,三种人肺源性细胞H19表达量逐渐升高(P<0.05),SAHH蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05);在32μmol/L Ba P染毒24h时,H19表达量达到峰值,较溶剂对照组增加了(16HBE 78.0%,VA13 78.4%,BEAS-2B 87.2%),而SAHH蛋白表达水平降至最低,较溶剂对照组降低了(16HBE 37.2%,VA13 32.1%,BEAS-2B 31.3%)。lnc RNA FISH结合IF结果显示,H19和SAHH蛋白均在细胞质及细胞核中表达,两者表达量在核周质中较高,与正常未染毒细胞相比,16μmol/L Ba P染毒24h后细胞内H19基因表达的荧光加强,而SAHH蛋白表达的荧光明显减弱,两者在细胞质和细胞核中共定位的荧光强度增加。RIP结果显示,与正常未染毒细胞相比,染毒后三种人肺源性野生型(WT)细胞SAHH核糖核酸蛋白复合物(ribonucleoproteins,RNPs)中的H19表达量均显著升高了5.53-8.46倍(P<0.01),而GAPDH表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。在SAHH过表达细胞未染毒时,WT-SAHH、M1-SAHH、M2-SAHH细胞内SAHH核糖核酸蛋白复合物中的H19表达量均较WT细胞显著增多(P<0.01),且在16μmol/L Ba P染毒24h后均明显升高(P<0.05),而M3-SAHH细胞染毒前后均与WT细胞相似(P>0.05)。与WT未染毒细胞相比,染毒后各型SAHH过表达细胞H19表达量明显升高(P<0.05),而M3-SAHH细胞H19表达量升高不显著(P>0.05),且与WT-SAHH染毒后相比明显降低(P<0.05)。与WT未染毒细胞相比,染毒后WT和si-NC细胞SAHH表达和活性水平均明显降低(P<0.05),而si-H19细胞SAHH表达和活性水平显著升高了(表达18.5%,活性94.9%)。析因分析结果显示,转染与染毒之间存在交互效应(P<0.05)。协方差分析控制染毒因素后,si-H19细胞SAHH表达和活性水平的修正均数(表达1.11,活性1.88)较WT细胞的修正均数(表达0.85,活性0.87)明显升高(P<0.05)。Pyrosequencing结果显示,与WT未染毒细胞相比,染毒后WT、si-NC、si-SAHH和si-H19+si-SAHH细胞OGG1甲基化水平均明显升高(P<0.05),而si-H19细胞染毒前后的OGG1甲基化水平均明显降低(P<0.05),较WT未染毒细胞分别降低了12.5%和28.2%(P<0.05)。析因分析结果显示,转染与染毒之间存在交互效应(P<0.05)。协方差分析控制染毒因素后,与WT细胞OGG1甲基化水平的修正均数(2.2%)相比,si-H19细胞(1.5%)明显降低(P<0.05),而si-SAHH细胞(2.5%)升高(P<0.05),si-H19+si-SAHH细胞(2.1%)则未见明显差异(P>0.05)。ELISA结果显示,与WT未染毒细胞相比,染毒后各型细胞8-OHd G含量均明显升高(P<0.05),且与WT细胞染毒后相比,si-H19细胞明显降低了7.6%,而siSAHH细胞显著升高了20.4%(P<0.05),si-H19+si-SAHH细胞则未见明显差异(P>0.05)。析因分析结果显示,转染与染毒之间存在交互效应(P<0.05)。协方差分析控制染毒因素后,与WT细胞8-OHd G含量的修正均数(1.13)相比,siH19细胞(1.09)降低(P<0.05),而si-SAHH细胞(1.24)明显升高(P<0.05),si-H19+si-SAHH细胞(1.15)则未见明显差异(P>0.05)。FCM结果显示,与WT未染毒细胞相比,染毒前si-SAHH和si-H19+si-SAHH细胞S期细胞比率分别升高了31.1%和18.1%(P<0.05),染毒后各型细胞S期细胞比率均明显升高(P<0.05);与WT细胞染毒后相比,染毒后si-H19细胞明显降低了13.6%(P<0.05),而si-SAHH细胞明显升高了13.5%(P<0.05),si-H19+siSAHH细胞则未见明显差异(P>0.05)。析因分析结果显示,转染与染毒之间存在交互效应(P<0.05)。协方差分析控制染毒因素后,与WT细胞S期细胞比率的修正均数(1.18)相比,si-SAHH和si-H19+si-SAHH细胞(1.40、1.31)明显升高(P<0.05),而si-H19细胞(1.17)未见明显差异(P>0.05)。结论:1、Ba P暴露促进H19与SAHH相结合并抑制SAHH表达及活性。2、H19与SAHH的相互作用参与调控OGG1甲基化水平。3、H19/SAHH调控OGG1甲基化水平在影响Ba P致DNA氧化损伤的过程中发挥作用。