目的:1.观察长期酒精刺激能否在体外诱导正常肝细胞株(LO2)产生脂肪变性、线粒体受损、内质网应激(ESR)等病理变化。2.探索乳源免疫调节肽(PGPIPN)是否具有延缓酒精刺激肝细胞损伤的作用,并探索其可能的分子机制。方法1.构建能稳定遗传的酒精刺激肝细胞损伤模型,MTT法筛选酒精和PGPIPN最佳用药范围,同时向正常LO2细胞加入酒精和不同浓度PGPIPN连续培养三个月。2.用油红O染色观察LO2脂肪变性程度。透射电镜对比各实验组线粒体、核仁等结构。3.RT-PCR检测脂肪合成基因(ACC)、线粒体受损相关基因(Cyt-C、Caspase-3)、内质网应激相关基因(GRP78和CHOP)的表达。4.Western Blotting检测脂肪合成相关蛋白(ACC)、线粒体受损相关蛋白(Cyt C、Caspase-3)、内质网应激相关蛋白(GRP78、CHOP)的表达。结果1.MTT筛选0.5%为酒精造模浓度,1×10-4g/L、1×10-3g/L、1×10-2g/L为PGPIPN最佳用药浓度,并用以上浓度造模成功。2.与正常肝细胞LO2相比,酒精用药组油红O染色出现明显脂肪变性,甚至出现脂肪粒融合现象,电镜则显示线粒体严重膨胀变性,而PGPIPN用药组可以缓解脂肪变性,线粒体膨胀变性。3.RT-PCR显示PGPIPN组与酒精组比较:ACC、Cyt-C、Caspase-3、GRP78、CHOP m RNA表达明显降低。4.Western Blotting显示PGPIPN组与酒精组比较:ACC、Cyt-C、Caspase-3、GRP78、CHOP蛋白表达明显降低。结论1.PGPIPN可放缓体外培养的LO2酒精诱导性脂肪病变,缓解LO2受损。2.机制可能是减少脂肪合成、减轻线粒体受损和内质网应激。