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目的：探讨水蛭提取物(leech extract, LE)对人肝癌HepG2细胞化疗药物敏感性的影响及机制。方法：比较液氮快速冻融法LE和传统水提醇沉法LE对HepG2细胞增殖的抑制作用并确定提取方法。以氟尿嘧啶(5-Fu)、阿霉素(ADM)对照,分别采用LE与5-Fu或ADM联合用药,体外干预HepG2细胞。采用MTT法检测各组药物对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,RT-PCR法检测MDR1和baxmRNA的表达,吖啶橙／溴乙锭(AO/EB)荧光染色法观察HepG2细胞凋亡形态。结果：1、液氮快速冻融法制备的LE对人肝癌HepG2细胞增殖有明显抑制作用,细胞数目明显下降,并呈剂量依赖性,与水提醇沉提取法比较,差异有显著统计学意义(P<0.01),从而确定液氮快速冻融法LE为下一步实验用药。2、LE可以增强5-Fu、ADM对HepG2细胞的抑制作用,差异有显著统计学意义(P<0.01)。倒置相差显微镜显示细胞数量明显减少,悬浮的圆细胞增多,细胞周围出现碎片；AO/EB荧光染色法观察到HepG2细胞明显的凋亡形态。3、LE可以增强5-Fu、ADM诱导HepG2细胞凋亡的作用,差异有显著统计学意义(P<0.01)。48h时,各药物组HepG2细胞凋亡率明显高于24h时,差异有显著统计学意义(P<0.01)。4、与5-Fu组比较,LE+5-Fu组HepG2细胞周期表现为GO／G1期、G2/M期细胞比例下降,s期细胞比例上升,差异有显著统计学意义(P<0.01)；与ADM组比较,LE+ADM组HepG2细胞周期表现为GO／G1期细胞比例下降,S期、G2/M期细胞比例上升,差异有显著统计学意义(P<0.01)5、与对照组比较,LE能够下调HepG2细胞MDR1 mRNA的表达,差异有显著统计学意义(P<0.01)；bax mRNA表达水平轻微上调,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1、液氮快速冻融法制备的LE体外抑制HepG2细胞增殖作用明显优于水提醇沉法。2、LE可体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提高对化疗药物5-Fu、ADM的敏感性。3、通过下调MDR1 mRNA的表达,可能是LE提高HepG2细胞化疗药物敏感性的重要分子机制。