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胃癌(Gastric cancer)是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。最新数据表明,胃癌在全球范围内的发病率位居恶性肿瘤的第四位,但死亡率高居恶性肿瘤的第二位。我国是胃癌发生的大国,胃癌死亡率高居不下,最主要原因是在胃癌早期诊断方面存在严重不足。近年来,随着全球医学科学的进步以及我国胃癌规范化治疗路径逐步完善,我国的胃癌治疗水平已得到很大提高。但胃癌的早期诊断和治疗的现状仍然不容乐观。大部分患者确诊时已经是中晚期,即使对其进行了以手术为主的综合治疗,仍有60%的患者出现了复发和转移,目前胃癌总体5年生存率仅在30%左右,这严重影响了胃癌患者的预后。因而,探索胃癌的发生和发展机制,寻找新的胃癌肿瘤标志物以及治疗靶点,进一步提高胃癌的早期诊断和治疗,监测胃癌的复发及转移,开展胃癌的靶向治疗和评估胃癌的预后是目前基础研究的方向与目标。SOX家族基因(SOX genes, SOXs)在肿瘤诊断以及肿瘤治疗中的作用越来越受到大家的关注,它们与肿瘤发生、发展关系密切,SOX家族基因的突变及异常表达与许多肿瘤相关。很多的研究表明SOX基因参与了多种肿瘤的发生和进展,其中,人们对SOX9基因研究得最多。在大部分的肿瘤细胞中SOX9表达升高,例如前列腺癌、大肠癌、软骨肉瘤、肺癌、皮肤癌、神经纤维瘤等,然而SOX9在黑色素瘤中的表达则下调,所以可能在不同的肿瘤细胞中,SOX9的功能也不一样。在胃癌细胞中,SOX9的功能尚不明确,在本研究中,我们检测了SOX9在胃癌细胞中的表达情况,并进一步对SOX9在胃癌的发生和进展中的作用进行了深入研究。癌胚抗原相关细胞黏附分子1 (carcinoembrynic antigen related cellular adhesion molecular 1,CEACAM1)是一种细胞表面跨膜糖蛋白,是癌胚抗原(carcinoembrynic antigen CEA)家族中一员,属于免疫球蛋白超家族黏附分子。CEACAM1在很多组织细胞中都有表达,包括内皮细胞和上皮细胞、粒细胞、单核细胞和活化的T细胞、B细胞以及自然杀伤细胞。CEACAM1的表达可以影响多种细胞的生物学行为,例如,细胞的生长增值、调亡、细胞迁移、细胞极化、血管生成、T细胞及B细胞激活、T细胞和自然杀伤细胞的毒性效应等。CEACAM1与肿瘤发生发展的关系也比较密切,目前在膀胱癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、子宫内膜癌中均发现有CEACAM1的表达下调或缺失,因而CEACAM1表达下调或缺失被认为参与了这些肿瘤的发生进展。然而,在另外一些肿瘤中CEACAM1的表达升高,并且高表达的CEACAM1促进了肿瘤细胞的生长和转移。Thies A等人发现在恶性黑色素瘤中,CEACAM1的表达能够促进肿瘤的生长,同样有研究发现CEACAM1肺腺癌中CEACAM1表达明显升高,CEACAM1在胃癌中的表达情况以及它在胃癌转移和预后中具体作用及机制尚不明确,在本研究中,我们研究了CEACAM1的表达情况,并且进一步研究了CEACAM1在胃癌细胞生长转移中的作用。第一部分SOX9和CEACAM1在胃癌组织中的表达及其意义研究目的：研究SOX9和CEACAM1在正常粘膜、增生性息肉、肠上皮化生、上皮内瘤变组织及在胃癌组织中的表达方式,分析不同的表达方式与不同临床病理指标之间的关系。研究方法：1.获取组织标本,制备蜡块后切片,免疫组化法检测SOX9和CEACAM1蛋白在正常粘膜、增生性息肉、肠上皮化生、上皮内瘤变组织和胃癌组织中的表达。2.获取新鲜组织标本,提取总RNA,通过Real-time PCR检测SOX9和CEACAM1的mRNA在正常粘膜、增生性息肉、肠上皮化生、上皮内瘤变组织和胃癌组织中的表达。3.采用Chi-square检验对SOX9和CEACAM1的表达与患者临床病理资料之间进行比较,分析其相关性。研究结果：1.SOX9的表达主要在胃小凹底部的细胞中,正常的胃黏膜和增生性息肉组织中,SOX9蛋白表达较低,在肠上皮化生组织中SOX9蛋白的表达开始升高,在胃的上皮内瘤变组织和胃癌中SOX9的表达进一步升高。2. CEACAM1在正常的胃黏膜和增生性息肉组织标本中基本没有表达,在肠上皮化生组织标本中,CEACAM1的表达逐渐增高,在胃癌组织中CEACAM1的表达进一步升高,并且CEACAMl在胞浆中的表达明显多于在胞膜上的表达。3.SOX9的表达与胃癌的分化程度没有明显的相关性,SOX9在肠型和弥漫型胃癌中的表达无明显差异,但是SOX9在N2-N3期胃癌组织标本中的表达明显升高于NO期胃癌(P<0.05)4. CEACAM1的表达可以分为胞膜表达、胞浆表达和混合型表达。胃癌的分化程度越低,CEACAM1在胞浆中的表达越多；在弥漫型胃癌中,CEACAM1在胞浆中的表达较高；在T3-T4期和N2-N3期胃癌中,CEACAM1在胞浆中的表达越多。5.在胃癌组织标本中,SOX9与CEACAM1表达呈正相关((r=0.124；P=0.032)。6.SOX9和CEACAM1 mRNA正常的胃黏膜和增生性息肉组织中表达较低,在肠上皮化生组织中表达开始升高,在胃上皮内瘤变组织和胃癌中的表达明显升高。研究结论：SOX9和CEACAM1的mRNA和蛋白在胃癌中的表达都明显升高,SOX9与CEACAM1表达呈正相关,SOX9与CEACAM1可能通过相互调节来促进胃癌的发生和发展。第二部分SOX9和CEACAM1的表达对胃癌细胞增殖和转移的影响研究目的：通过siRNA沉默SOX9或者CEACAM1表达,观察SOX9或者CEACAM1沉默后对胃癌细胞SGC-7901增殖和转移的影响。研究方法：1.通过siRNA沉默SOX9、CEACAM1的表达,然后通过MTT检测SOX9、EACAM1沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。2.通过siRNA沉默SOX9、CEACAM1的表达,通过流式细胞检测SOX9、CEACAM1沉默对胃癌细胞SGC-7901周期和凋亡的影响。3.通过siRNA沉默SOX9、CEACAM1的表达,然后通过Transwell实验检测SOX9、CEACAM1沉默对胃癌细胞SGC-7901转移的影响。研究结果：1.降低SOX9的表达对胃癌细胞株SGC-7901的生长增殖具有明显的抑制作用,但是降低CEACAM1的表达对胃癌细胞株SGC-7901的生长增殖没有明显影响。2.降低SOX9的表达使更多的SGC-7901细胞阻滞在GO-GI期,并且引起明显的细胞凋亡；降低CEACAM1的表达,不会明显影响细胞周期分布,也未明显引起细胞凋亡。3.降低SOX9和CEACAM1的表达后,可以使胃癌细胞SGC-7901的转移能力明显下降。研究结论：沉默SOX9的表达可以明显抑制胃癌细胞的的生长侵袭和转移；沉默CEACAM1的表达可以明显抑制胃癌细胞的转移。进一步表明SOX9和CEACAM1在胃癌中的表达可以促进胃癌的进展。SOX9和CEACAM1有可能成为胃癌治疗的新靶点。