金铁锁ITS序列分析及其鲨烯合酶基因原位杂交

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金铁锁(Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu)系石竹科(Caryophyllaceae)单种属植物,为中国西南特有濒危物种为云南白药的主要组成药材之一。由于其长期以来完全靠野生采挖,自然生长及药材蕴藏量有限,资源逐渐减少,现已作为稀有濒危物种列于《中国植物红皮书》中,是国家二级保护植物。本论文以鉴别不同居群金铁锁及其伪品瓦草,构建金铁锁指纹图谱以及扩大金铁锁药用部位,综合利用日益匮乏的金铁锁资源为目的,以金铁锁的ITS序列和鲨烯合成酶为目标,分别采用分子标记技术(ITS)和组织原位杂交技术对其进行研究,主要结果和结论如下:1.金铁锁不同地区的测序结果基本完全相同,只相差1-4个bp,同源性达到99%以上,说明金铁锁不同居群间ITS序列较为稳定。而西藏林芝为分布的最西北端,存在一定的地理隔离,ITS序列与其他居群相差最大,可能是在喜玛拉雅山脉隆起之后变异新分化出的一支。2.金铁锁与瓦草的同源性只有73%,也就是说差异碱基达到了150bp以上,因此能在分子水平将他们区分开,说明利用ITS序列来鉴定和检验金铁锁药材检验伪品瓦草是十分可靠的。3.原位杂交结果显示金铁锁鲨烯合成酶基因的mRNA的表达在金铁锁根中分布于皮层、内皮层、韧皮部,而木质部没有检测到杂交信号。在金铁锁叶中分布于栅栏组织和海绵组织中,而叶脉中没有检测到杂交信号。由此可见金铁锁鲨烯合成酶基因的mRNA存在于薄壁组织中。
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