论文部分内容阅读
目的通过观察内热针疗法对激素性股骨头缺血性坏死（Steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH）模型大鼠行为学、股骨头组织的形态学及股骨头组织中骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-k B ligand,RANKL）表达的影响。观察内热针疗法对大鼠SANFH的治疗效果,进一步探讨其治疗SANFH的部分作用机制,以便为临床上内热针治疗SANFH提供理论依据。方法1实验动物模型的建立及分组:选择30只健康、无特定病原体的SD大鼠采用随机数字表法,分为空白组10只、造模组20只。采用甲基强的松龙联合大肠杆菌内毒素的方法制备SANFH模型,造模成功后再随机分为模型组10只和治疗组10只。2实验干预及取材:治疗组:对SD大鼠双侧臀部进行每周1次的内热针治疗,每次20分钟,设定温度为42℃,连续治疗4周;空白组和模型组均不采取任何处理。干预4周后对SD大鼠双侧股骨头取材。3观察指标:干预前后对SD大鼠进行一般状态和行为学检测实验（测定自主活动次数和抓力）;采用苏木精-伊红染色观察各组SD大鼠股骨头骨组织形态学变化并计算空骨陷窝率;从分子生物学层面采用免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测各组大鼠股骨头组织中OPG、RANKL蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,q RT-PCR）检测各组大鼠股骨头组织中OPG、RANKL m RNA的表达。结果1行为学评分:与空白组相比,模型组和治疗组SD大鼠的相关行为学评分明显降低（P＜0.01）,具有明显统计学差异;干预后,与模型组相比,治疗组SD大鼠的相关行为学评分升高（P＜0.05）,具有统计学差异。2苏木精-伊红染色:空白组骨小梁排列整齐致密,骨小梁内骨细胞清晰可见,脂肪细胞形态正常,成骨细胞丰富,空骨陷窝率较低;与空白组相比,模型组骨小梁减少、骨陷窝排列紊乱、骨髓脂肪细胞体积增大、部分脂肪细胞融合成泡状物等形态异常,空骨陷窝率显著升高（P＜0.001）;治疗组干预后,观察到治疗组骨小梁、骨陷窝、骨髓和脂肪组织均有显著改善;空骨陷窝明显减少,骨小梁内可见核固缩的骨细胞,变薄但不弥散;特别是骨髓腔内有丰富的骨髓细胞和少量的脂肪细胞,空骨陷窝率显著降低（P＜0.05）。3股骨头组织中OPG和RANKL蛋白表达情况:与空白组相比,模型组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的蛋白表达水平明显升高,而OPG的蛋白表达水平明显降低,差异均有显著统计学意义（P＜0.001）;经内热针治疗后,与模型组相比,治疗组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的蛋白表达水平明显降低,OPG的蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。4股骨头组织中OPG和RANKL m RNA表达情况:与空白组相比,模型组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的m RNA表达水平明显升高,OPG的m RNA表达水平显著降低,差异均有显著统计学意义（P＜0.001）;经内热针治疗后,与模型组相比,治疗组SD大鼠股骨头组织中的RANKL的m RNA表达水平明显降低,OPG的m RNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论内热针疗法可能通过上调OPG的表达和下调RANKL的表达,抑制破骨细胞的功能及活性,从而抑制骨吸收,促进新骨的形成及骨组织修复。