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题目:腹腔镜手术及开腹手术前后血清对ECV304生成内皮型一氧化氮合酶的影响目的:通过观察妇科腹腔镜手术及开腹手术患者手术前后血清中eNOS含量的变化,并将患者血清作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV304),观察细胞形态有无变化及合成eNOS的情况,探讨妇科腹腔镜手术的特殊因素是否会增加血管内皮细胞的损伤,从而增加术后静脉血栓发生的危险性。方法:预实验:用酶联免疫双抗体夹心法(ELISA)测定实验前期8名患者的未灭活血清及未灭活血浆中eNOS的含量,确定未灭活血清为实验标本来源。(1)选取行腹腔镜全子宫切除术19例为研究组,经腹行全子宫切除术19例为对照组,于术前及手术结束时抽取静脉血测定内皮型一氧化氮合酶的含量,观察腹腔镜手术及开腹手术对eNOS的影响。(2)将腹腔镜全子宫切除术及开腹全子宫切除术患者(各8例)术前术后血清做为干预介质作用于体外培养的ECV304,观察细胞形态的改变及采用ELISA法测定细胞液中内皮型一氧化氮合酶的含量变化。研究结果计量资料采用t检验、单因素方差分析、样本均数方差分析(F检验),并采用SPSS17.0进行统计学分析。结果:1.同一患者手术前后未灭活血清及未灭活血浆中内皮型一氧化氮合酶含量的差异无统计学意义(P>0.05)。2. (1)研究组及对照组的本身术前及术后的比较显示,两组术后eNOS的含量均有不同程度的下降,但是差异无统计学意义(P>0.05)。(2)比较研究组及对照组手术前后eNOS含量的差值,组间差异无统计学意义(P>0.05)。3. (1)不加干预血清的空白对照组ECV304细胞培养2h、6h、12h、24h后,其细胞培养液中eNOS的含量变化无统计学意义(P>0.05)。(2)研究组及对照组术前术后血清加入细胞培养液中培养2h、6h、12h、24h后,其上清液中的eNOS含量较干预前血清中基础eNOS的含量稍微下降,但差异无统计学意义,(P>0.05)。比较作用不同的时间各组eNOS的含的量,组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)研究组术前术后血清作用于ECV304细胞2h、6h、12h、24h后,经过相同的作用时间,比较术前术后两组血清干预的细胞培养液中的eNOS的含量,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)对照组术前术后血清作用于ECV304细胞2h、6h、12h、24h后,经过相同的作用时间,比较术前术后两组血清干预的细胞培养液中的eNOS的含量,差异无统计学意义(P>0.05)。(5) ECV304细胞传代培养后,细胞多呈梭形和不规则三角形,具有鹅卵石样的单层生长的特点。细胞贴壁生长,境界清楚;核呈圆形或椭圆形,胞浆丰富,有小突起自细胞内向外伸出,形成纤维丝,胞膜完整,胞质透明,有细胞堆积现象。ECV304细胞具有一般内皮细胞的某些特征。经干预血清作用24h后,倒置相差显微镜下观察研究组及对照组细胞形态,均有不同程度的细胞变圆及脱落现象。结论:1.未灭活血清更适合作为实验的标本来源;2.与经腹全子宫切除手术相比,腹腔镜全子宫切除术并未明显损伤内皮细胞的分泌功能,未导致内皮型一氧化氮合酶合成减少;3.腹腔镜手术患者的血清作用于体外培养的ECV304细胞,对ECV304细胞的分泌功能无明显影响;4.对无血栓高危因素的患者施行腹腔镜手术,一般来说,并不增加下肢静脉血栓形成的危险性。