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目的 探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)与气液界面无血清培养原代兔气管粘膜上皮细胞的相互作用;将该菌作用于原代培养人的气管、支气管粘膜上皮细胞,诱导其分泌和表达前炎症细胞因子并观察其变化;了解上海地区门急诊COPD急性加重期(AECB)患者气道的细菌感染情况,分别比较脓痰组、白粘痰组的痰炎性细胞数与细菌阳性率,并研究AECB患者气道细菌感染对气道炎症的影响。 方法 (1)用低温酶消化法分离兔气管粘膜上皮细胞,无血清培养基及胶原覆盖膜形成的气液界面培养方式培养,使上皮细胞分化成假复层粘膜纤毛上皮细胞,然后加入NTHi感染上皮细胞,24小时后行扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)检查;(2)同上法分离人气管、支气管粘膜上皮细胞(HBEC),无血清培养基培养细胞融合成片,分别用NTHi、NTHi+红霉素(0.1mg/L)、NTHi+红霉素(10mg/L)、NTHi+庆大霉素(100mg/L)、NTHi+地塞米松(0.1mM)、正常未处理为对照组感染HBEC24h后,ELISA法检测培养上清液中IL-8、TNF-α的水平和免疫组化法检查细胞表达ICAM-1的变化;(3)收集门急诊慢性支气管炎、COPD急性加重期患者159份痰液进行分离培养,并对痰颜色进行评分、炎症细胞计数与细胞分类检查,研究脓痰组、白粘痰组的痰炎性细胞数与细菌阳性率的差异;(4)收集97份取自于97例AECB患者痰,被分为5组,铜绿假单胞菌组、肺炎克雷白杆菌组、流感嗜血杆菌组、副流感嗜血杆菌组和无细菌生长组,15份痰取自于15例正常健康对照组,对痰液进行炎性细胞计数与细胞分类检查,并用ELISA法测定痰上清液中白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素6(IL-6)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。 结果 (1)NTHi感染24h后SEM示气管粘膜上皮细胞表面结构破坏,90%细胞凋亡或死亡,纤毛倒伏、断裂,细菌与非纤毛上皮细胞连接,TEM示细胞表面有较多微绒毛,细菌粘附在细胞表面,伴微绒毛延伸或伪足包绕细菌,将其吞噬至胞内;(2)NTHi能显著诱导HBEC释放IL-8、TNF-α和细胞膜表达ICAM-1,与正常对照组相比(P<0.001),0.1mg/L红霉素、庆大霉素组与NTHi组类似显著诱导HBEC释放IL-8、TNF-α和ICAM-1的表达,10mg/L红霉素、地塞米松组抑制IL-8、TNF-α分泌和ICAM-1的表达,尤以地塞米松组为显著;(3)共鉴定出致病菌92株(57.9%), 省二军医大学不士学位论文主要为流感嗜血杆菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌,159份痰中副流感嗜血杆菌共57株o5.90),脓痰87份,细菌阳性率为82.7o,白粘痰72份,细菌阳性率27.8%,两组相比有显著差异沙功力01),脓痰白细胞总数显著高于白粘痰?<O.001):K)AECB患者痰中*{、IL6、TNF川的水平及中性粒细胞计数显著高于健康对照组,铜绿假单胞菌组、Hi组、肺炎克雷白杆菌组IL-8、TNF-Q的水平及中性粒细胞计数均显著高于无细菌生长组,铜绿假单胞菌组和Hi组IL-8、TNF-Q的水平高于肺炎克雷白杆菌,HP组与无细菌生长组相比IL-8、TNF-a的水平无显著差异,但中性粒细胞显著升高,AECB患者各组IL6无显著差异。 靴*)NTHi粘附在上皮细胞表面,通过伪足和微绒毛延伸包绕细菌,将细菌吞噬在胞内,NTlli对上皮细胞有毒性作用,致上皮细胞变性坏死;@)HBEC能分泌IL8和hFk,NTHi作用后显著诱导人气管粘膜上皮细胞分泌和表达前炎症细胞因子,庆大霉素无抗炎作用,红霉素有抗炎作用,地塞米松有显著抗炎作用:O)AECB患者脓痰中细菌阳性率较白粘痰显著增高,可以作为抗菌药物治疗指征,气道细菌感染导致中性粒细胞明显增高,痰颜色加深,气道炎症加重;以)AECB患者气道有Hi、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌感染,其有关气道炎症标志增加,支持它们在AECB中起着病原学作用。