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本研究用人胃癌细胞AGS免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备了抗人胃癌细胞的单克隆抗体(McAb),初步鉴定了杂交瘤和McAb的生物学特性,包括:杂交瘤的染色体、McAb的效价和亚类以及McAb的特异性。一人胃癌细胞AGS(抗原)的培养常规方法体外培养人胃癌细胞AGS。通过绘制生长曲线,研究了AGS细胞的增殖规律,结果表明:AGS细胞生长增殖的潜伏期为1-2 d,对数生长期为2-5d,停滞期为5-8 d。以DMSO为冷冻保护剂,对AGS细胞进行冷冻复苏。以该方法冻存的细胞解冻后的贴壁率为96.31%。这说明该方法对AGS细胞进行冷冻是切实可行的。二抗人胃癌细胞AGS单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、筛选和克隆1.制备用AGS细胞免疫5只雌性Balb/c小鼠,间隔3周免疫1次。双方阵法确定了间接ELISA法的最佳抗原包被浓度为2×10~5/ml,阳性血清最适工作稀释度为1:10~4。间接ELISA法检测抗体效价达到1:10~4的3d后,通过PEG4000使免疫B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。融合3d后出现杂交瘤细胞,7-10 d后观察到杂交瘤细胞克隆生长。经HAT培养基选择培养后,细胞的融合率为51.04%。2.筛选间接ELISA法的结果显示:只有1B4孔的上清液重复3次检测的P/N均大于2.1,呈阳性。3.克隆用显微操作法挑出杂交瘤1B4的单个细胞并接种于96孔细胞培养板,将杂交瘤培养上清液按1:10~4稀释,间接ELISA法第一次检测后,有9个孔呈阳性。第二次检测后,仅有1B4孔杂交瘤(命名为1B4)分泌的抗体仍呈强阳性。三抗人胃癌细胞AGS单克隆抗体杂交瘤细胞株和McAb的初步鉴定1.杂交瘤细胞染色体杂交瘤细胞染色体的平均数为92条,符合融合细胞染色体的特点。2.McAb的效价间接ELISA法检测到杂交瘤1B4上清液中McAb的效价可达1:10~4。3.McAb的亚类Ig类及亚类的鉴定结果说明该McAb属于IgG1亚类。4.McAb的特异性免疫化学法和间接ELISA法的结果均提示:McAb 1B4与宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株HepG和正常人胎肺细胞均呈阴性反应,即不存在明显的交叉反应;但它与胃癌细胞株AGS呈明显阳性反应,说明该McAb可能对人胃癌有一定的特异性。