光化学传感器的构建及对半胱氨酸、灭蝇胺和大肠杆菌O157:H7的检测

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光化学传感器因其具有操作简单、价格低廉、高效、能实时在线的快速连续监测等特点而受到国内外科研人员的关注,已被广泛应用于环境、食品安全监测、重金属离子检测、生物分析等领域。光化学传感器主要是基于溶液颜色及紫外吸收峰、荧光发射峰的变化进行分析。本研究构建了三种光化学传感器,并对其在半胱氨酸、大肠杆菌O157:H7、灭蝇胺检测方面的应用进行了研究,主要工作如下:(1)设计了一种灵敏性高、选择性强的比色检测半胱氨酸的方法。实验机理是利用G-四联体模拟过氧化氢酶的性质,催化2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)与过氧化氢(H2O2)的氧化反应,当反应体系中加入半胱氨酸后,由于半胱氨酸中的活性巯基易被双氧水氧化成-S-S-键,从而消耗了双氧水的量,阻止了ABTS-H2O2反应,使溶液中蓝绿色自由基阳离子(ABTS·+)的含量降低,从而引起溶液颜色发生从蓝色到无色的变化,421nm处紫外吸收峰强度逐渐减弱,以此检测体系中半胱氨酸的浓度。在最佳条件下,421nm处紫外吸收峰强度的变化值与半胱氨酸浓度对数值呈线性关系,检测范围为0.005100μmol/L,检测限为5nmol/L。此外,对该传感器的选择性进行研究,实验结果显示在人体20种氨基酸中只有半胱氨酸能引起该传感器信号发生变化,说明该比色传感器对半胱氨酸具有高选择性。(2)设计了一种基于Au@Pt纳米材料作比色探针,检测水体中大肠杆菌O157:H7的浓度。在本实验中首先将Au@Pt纳米材料进行功能化,利用巯基与金属之间强金硫键将巯基苯硼酸修饰到纳米材料上,进而硼酸基裸露在纳米材料的表面。然后利用硼酸基与大肠杆菌O157:H7表面的糖蛋白发生反应生成糖苷键,将纳米材料吸附到大肠杆菌O157:H7的表面,最后利用Au@Pt纳米材料过氧化氢模拟酶的性质催化四甲基联苯胺(TMB)与H2O2的反应,从而使溶液颜色发生无色到蓝色的变化,同时652nm处紫外吸收信号峰发生变化,以此检测大肠杆菌的浓度。在最佳条件下,652nm处紫外吸收信号峰强度值与大肠杆菌浓度的对数值呈线性关系,检测范围为76×106cfu/mL,检出限为7cfu/mL。(3)利用没食子酸为还原剂室温条件下还原氯金酸,制备了一种以没食子酸为保护剂的球形纳米金溶胶,在反应过程中没食子酸担任还原剂与保护剂的双重角色。该纳米金粒子平均直径为~37nm,在296nm波长下激发可在318nm处有显著的荧光发射峰。将灭蝇胺加入到反应体系中时,由于灭蝇胺上的氨基与没食子酸的羧基发生氢键作用,夺取了参与还原氯金酸反应中的还原剂,从而扰乱了纳米金的形成过程,使最终制备的纳米金溶胶颜色发生从紫色到黄绿色的变化,同时其荧光性质也发生改变,据此检测灭蝇胺。在最佳检测条件下,纳米金溶胶在318nm处荧光发射峰强度的变化值与灭蝇胺浓度呈线性关系,检测范围为0.075.90mol/L,检出限为0.07mol/L。另外,对实际牛奶和宠物饲料样品进行了测试,取得了令人满意的实验结果。
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