神经母细胞瘤是常见于儿童的颅外肿瘤,是一种恶性程度和死亡率都较高的肿瘤,儿童发病率为10.5/10万,在儿童所有肿瘤中的比例约为6-10%,却占有约15%的儿童肿瘤死亡率。目前只要采用手术的方法来治疗神经母细胞瘤,并辅以化疗、放疗等方式进行治疗。寻找新型有效毒副作用较小的化疗药物具有重要的意义。脱氧胆酸是一种次级胆汁酸,由胆酸在C-7位置上的一个羟基脱去氧生成,已有研究表明其对一些肿瘤具有抑制的作用。本论文将研究其对于神经母细胞瘤的作用,以SHSY-5Y作为体外模型,在体外探究脱氧胆酸对其作用后所引起的细胞形态变化及其作用机理的研究。采用体外细胞培养的方法,用不同浓度的脱氧胆酸(DCA)处理SHSY-5Y细胞,用MTT法检测细胞存活率;通过AO/EB、Hoechst染色用荧光显微镜进行形态学观察;划痕实验探究DCA对细胞迁移的影响;通过不同荧光染色的流式细胞术来检测DCA作用后细胞周期的分布、活性氧含量和以及细胞凋亡率;通过Western Blot和RT-PCR检测DCA处理后相关蛋白和基因的表达变化情况探讨DCA作用的分子机制。结果表明,DCA作用能够抑制SHSY-5Y细胞株的增殖,可以促进细胞乳酸脱氢酶的释放,可以使细胞形成克隆能力下降。通过形态学观察,发现细胞呈现出细胞变圆皱缩、细胞核染色质浓缩、细胞核碎裂形成凋亡小体等凋亡特征性的形态学现象。划痕实验表明,DCA作用下,细胞迁移能力降低。流式细胞仪检测细胞周期分布、细胞凋亡率、活性氧含量结果显示,经DCA诱导处理48h后,细胞周期在G2/M期所占比例显著增多,细胞凋亡率明显增大,细胞内活性氧增加,均表现为浓度依赖性。0.8 mmol/LDCA处理48 h后SHSY-5Y处于G2/M期细胞由10.0%提升到41.5%,细胞凋亡率由1.46%提升至 51.81%。Western blot 和 RT-PCR 结果显示,在 DCA 作用下,p21、p53、Bax等相关抑癌基因表达水平上调,Bcl-2、Akt等相关致癌基因表达水平下调,CDK1、CylinB1等周期蛋白表达量下降。从而我们可以得出基本结论,DCA作用下,通过影响p21、p53、CDK1、CylinB1等相关因子的表达,可以将细胞周期阻滞在G2/M期;通过影响Bcl-2、Bax、Akt等蛋白的表达量进而导致线粒体膜电位下降,膜通透性增加,进而释放Cytc到胞浆,与胞浆内Apaf1结合,各因子之间级联反应放大凋亡效应,下游凋亡执行者Caspase被激活,引起SHSY-5Y细胞凋亡。综上所述,DCA可以显著抑制神经母瘤细胞SHSY-5Y增殖,并呈浓度依赖关系;DCA处理后,使细胞周期被阻滞在G2/M期,并经线粒体途径诱导细胞凋亡。