鲍氏层孔菌子实体化学成分及药理活性研究

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鲍氏层孔菌是中药“桑黄”的来源之一,有着长时间的药用历史;有抗癌、抗氧化、抗肝纤维化、调节免疫等活性。本文在前人研究的基础上对其化学成分及药理活性进行研究,旨在促进该菌的进一步开发,为“桑黄”的综合利用研究提供理论依据。主要研究内容包括鲍氏层孔菌的化学成分、体外抑菌活性、体内抗肿瘤活性及其黄酮类成分的提取工艺,研究结果如下:1.鲍氏层孔菌子实体经干燥、粉碎后,采用系统溶剂提取法,依次用石油醚(30-60)、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇连续回流提取,分别得到石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和甲醇提取物。通过硅胶和凝胶柱层析从其子实中各提取物中分离得到了9个化合物,并运用MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT等手段分别鉴定为:7(8),22(23)-二烯-3-酮-麦角甾烷、4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷、麦角甾醇、麦角甾醇过氧化物、三十烷酸对羟基苯乙酯、hispolon、4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯酮、hispidin和脑苷脂B。其中7(8),22(23)-二烯-3-酮-麦角甾烷、4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷、4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯酮为首次在该菌中分离得到,三十烷酸对羟基苯乙酯为首次从真菌中发现。2.采用K-B纸片法和常量肉汤稀释法,对鲍氏层孔菌石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇提取物进行体外抑菌活性研究。其中石油醚提取物对大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538均有抑制活性,在浓度为40.96mg/mL下抑制率分别为35.33%和40.49%,且呈量效关系。石油醚提取物各浓度均对枯草芽孢杆菌有抑制作用,在浓度为40.96mg/mL时最高抑菌率为10.96%。石油醚层提取物对各菌的最低抑制浓度为2.048~4.096mg/mL。氯仿提取物对大肠杆菌ATCC8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538和枯草芽孢杆菌均有抑制作用,其中在浓度为40.96mg/mL时抑制率最高,分别为15.09%、44.22%、10.13%,。氯仿提取物对大肠杆菌ATCC8099的最低抑菌浓度为2.048mg/mL,对金黄色葡萄球菌ATCC6538和枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度大于4.096mg/mL。乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌ATCC6538有抑制作用,且呈量效关系,其中在浓度为40.96mg/mL时最高抑制率为32.04%。对大肠杆ATCC8099和枯草芽孢杆菌有一定的抑制作用,在浓度为40(?)96mg/mL时,最高抑制率分别为37.7%和8.90%。乙酸乙酯提取物对大肠杆菌ATCC8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538和枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度分别为1.024mg/mL、4.096mg/mL和4.096mg/mL。丙酮提取物对大肠杆菌ATCC8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538和枯草芽孢杆菌的抑制作用呈量效关系,在浓度为40.96mg/mL时抑菌率最高,分别为32.98%、33.50%和11.34%。丙酮提取物对金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠杆菌ATCC8099和枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度分别为1.024mg/mL、0.512mg/mL和2.048mg/mL。甲醇提取物对大肠杆菌ATCC8099和枯草芽孢杆菌的抑制作用呈量效关系,在浓度为40.96mg/mL时抑制率最高,分别为34.69%和6.81%。高、中浓度对金黄色葡萄球菌ATCC6538有抑制作用,抑制率分别为9.48%和2.37%,而低浓度时没有抑制作用。甲醇提取物对金黄色葡萄球菌ATCC6538的最低抑菌浓度为4.096mg/mL,对大肠杆菌ATCC8099的最低抑菌浓度为2.048mg/mL,对枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度大于4.096mg/mL。3.体内抗肿瘤活性方面,鲍氏层孔菌子实体石油醚提取物对H22荷瘤小鼠的肿瘤生长有抑制作用,剂量为100mg/kg/d时,抑瘤率达19.76%。与对照组和CTX组对比,脾指数指数都明显增加(P<0.05)。当剂量为1000mg/kg/d时,甲醇提取物对H22荷瘤小鼠的肿瘤生长抑制作用最好,抑瘤率达到22.12%;与对照组和CTX组对比,脾指数明显增加,差异显著(p<0.05)。4.鲍氏层孔菌黄酮类成分的提取工艺研究。采用单因素分析和正交设计法优化提取工艺,经方差分析表明各因素均对黄酮类成分提取有直接影响,且影响顺序为:温度>固液比>提取时间>乙醇质量分数;综合最佳提取工艺条件为温度80℃,乙醇质量分数70%,固液比1:20,提取时间8h。在此工艺下,提取黄酮的质量与样品的质量比可达15.5027±0.3318mg/go
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