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目的本课题旨在应用经典的皮肤过敏手段建立HSP大鼠动物模型,探究芪元颗粒有效部位(群)治疗过敏性紫癜的作用及机理研究,将为芪元颗粒更广泛地应用于临床提供了理论与实践基础。若芪元颗粒有效部位(群)新药能研发成功,将进一步增强原有的临床疗效,为更多的患者带来福音,推广前景十分广阔。方法购买清洁级SD雄性大鼠80只,体重180±20g,6周龄。饲养于清洁级动物房,室内温度保持为(22±1)℃,相对湿度保持为(46±5)%。适应喂养一周后,对80只SD大鼠按随机数字表法分为8个组,分别是正常组、模型组、阳性对照组(即西咪替丁组,以下简称阳性组)、芪元颗粒组、挥发油组、多糖和蛋白质组、皂苷组、黄酮组,每组10只,实验前每组自由饮水、摄食。除正常组外,其余组均造模。以干姜、荜茇、胡椒以1:1:1比例在60℃恒温水浴锅上浓缩成12.5%/mL水溶液,置4℃冰箱储存备用。将动物适应实验环境1周后予除正常组以外的其他7组大鼠灌胃,3ml/只,均1次/d,正常组给予等量生理盐水灌胃,自由饮食。用药3周。之后将模型组、阳性组、芪元颗粒组、挥发油组、多糖和蛋白质组、皂苷组、黄酮组大鼠给予腹腔注射含鸡卵蛋白1mg+氢氧化铝凝胶0.5mL+800ng脂多糖+1%伊文思蓝的生理盐水2mL/只,1次/7d,共2次。第二次注射后10min内皮肤外涂含OVA1mg+氢氧化铝凝胶0.5mL+800ngLPS的生理盐水1mL/只进行激发过敏反应。正常组用等量生理盐水操作。在大鼠致敏一周后,治疗组分别以芪元颗粒中药浓缩汤剂(黄芪30g、元参20g、当归15g、金银花15g、白茅根9g、甘草6g)、总多糖和蛋白质、总黄酮、总皂苷、总挥发油灌胃治疗,2ml/只,均1次/d,阳性组以等量的西咪替丁灌胃治疗,连续14天。通过大鼠血清、尿蛋白病理指标验证模型,期间统计大鼠体重及一般行为学,后腹腔注射10%的水合氯醛进行麻醉,腹主动脉采血,离心常规制备血清于-80℃低温冰箱中备用,取出肾脏组织,用生理盐水冲洗干净置于甲醛中固定备用。后制备样本,采用ELISA技术处理血、尿样本,用光镜、电镜检查大鼠肾脏病理。数据采用SPSS19.0处理,采用组间独立样本t检验、以p<0.05表示差异具有显著性。结果(1)动物在实验期间有明显的行为学变化,模型组大鼠病理指标(CIC、IL-2、UP)异常,说明过敏性紫癜模型验证良好,可作为动物模型参考。芪元颗粒的有效部位(群)挥发油、多糖和蛋白质、皂苷、黄酮等,均能调控生化指标,可有效治疗、干预过敏性紫癜。(2)ELISA结果:(1)正常组大鼠血清CIC浓度最低,模型组大鼠血清CIC浓度最高,两者相比差异明显(P<0.05);阳性组、芪元颗粒组、多糖和蛋白质组、黄酮组、皂苷组、挥发油组大鼠血清CIC浓度与模型组比差异明显(P<0.05),说明治疗作用良好。各个治疗组之间比较,阳性组与芪元组比较,两者差异不明显(P>0.05),而阳性组和芪元组与其他治疗组差异明显(P<0.05),但与正常组比较差异不明显(P>0.05),说明芪元组与阳性组治疗效果最好;多糖组与其他治疗组比较,差异明显(P<0.05);黄酮组与其他治疗组比较差异明显(P<0.05);挥发油组与其他治疗组比较差异明显(P<0.05),但与皂苷组比较差异不明显(P>0.05),说明挥发油组与皂苷组治疗水平相对持平;皂苷与其他治疗组比较差异明显(P<0.05),但与挥发油组比较差异不明显(P>0.05),说明两者治疗作用相当。(2)正常组大鼠血清IL-2浓度最低,模型组大鼠血清IL-2浓度最高,两者相比差异明显(P<0.05);阳性组、芪元颗粒组、多糖和蛋白质组、黄酮组、皂苷组、挥发油组大鼠血清IL-2浓度与模型组比差异明显(P<0.05),说明治疗作用良好。各个治疗组之间比较,阳性组与芪元组比较,两者差异不明显(P>0.05),而阳性组和芪元组与其他治疗组差异明显(P<0.05),但与正常组比较差异不明显(P>0.05),说明芪元组与阳性组治疗效果最好;多糖组与其他治疗组比较,差异明显(P<0.05);黄酮组与其他治疗组比较差异明显(P<0.05);挥发油组与其他治疗组比较差异明显(P<0.05),但与皂苷组比较差异不明显(P>0.05),说明挥发油组与皂苷组治疗水平相对持平;皂苷与其他治疗组比较差异明显(P<0.05),但与挥发油组比较差异不明显(P>0.05),说明两者治疗作用相当。(3)正常组大鼠UP数目最低,模型组大鼠UP数目最高,两者相比差异明显(P<0.05);阳性组、芪元颗粒组、多糖和蛋白质组、黄酮组、皂苷组、挥发油组大鼠UP数目与模型组比差异明显(P<0.05),说明治疗作用良好。各个治疗组之间比较,阳性组与芪元组比较,两者差异不明显(P>0.05),而阳性组和芪元组与其他治疗组差异明显(P<0.05),但与正常组比较差异不明显(P>0.05),说明芪元组与阳性组治疗效果最好;多糖组与其他治疗组比较,差异明显(P<0.05);黄酮组与其他治疗组比较差异明显(P<0.05);挥发油组与其他治疗组比较差异明显(P<0.05),但与皂苷组比较差异不明显(P>0.05),说明挥发油组与皂苷组治疗水平相对持平;皂苷与其他治疗组比较差异明显(P<0.05),但与挥发油组比较差异不明显(P>0.05),说明两者治疗作用相当。(3)肾脏病理结果正常组肾脏组织未见明显异常改变,模型组可见肾小球萎缩,间质增生,小血管扩张、充血,肾小管结构紊乱;芪元组肾脏组织可见肾小球、肾小管无明显异常改变,微量炎细胞浸润;阳性组肾脏组织肾小管未见明显改变,肾小球数量微增加,微量炎细胞浸润;多糖组、黄酮组可见肾小球数量增多,间质变少,血管扩张,肾小管炎细胞浸润;皂苷组、挥发油组可见肾小球数量增多,间质变少,血管扩张,肾小管肿胀,小管间出血,炎细胞浸润。结论(1)芪元颗粒复方及有效提取成分可以降低实验模型大鼠24h尿蛋白定量,减少实验模型大鼠血清循环免疫复合物(CIC)含量,降低实验模型大鼠血清IL-2含量,减少实验模型大鼠肾小球系膜IgA、IgG、IgA+IgG沉积,改善肾脏血管内皮。(2)芪元颗粒、总多糖和蛋白质、总黄酮、总皂苷、总挥发油均能干预HSP,且有一定疗效。根据数据分析结果示,其疗效是芪元颗粒>总多糖和蛋白质>总黄酮>总皂苷>总挥发油。(3)本课题实验采用的过敏体质的建立→连续抗原刺激致敏→抗原冲击激发过敏反应建立的HSP模型可被重复,可作为HSP动物实验模型。