论文部分内容阅读
目的：
研究糖尿病早期大鼠视网膜功能的改变和神经、血管组织结构的病理改变；并探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对糖尿病早期大鼠视网膜组织的保护作用。
方法：
1.雄性Wistar大鼠分为三组，正常对照组腹腔注射柠檬酸缓冲溶液；糖尿病组通过腹腔注射STZ建立模型；治疗组为糖尿病模型建立后两周玻璃体腔注射BDNF，每周一次，共两次。
2.三组大鼠造模后一月行多焦视网膜电图(mfERG)检查，评价糖尿病早期大鼠视网膜功能性改变和BDNF治疗后的影响。
3.造模一月后灌注处死大鼠，完整取出眼球分离视网膜，进行电镜和毛细血管内皮细胞紧密连接蛋白(occludin)免疫荧光染色，同时取球后视神经6-8mm，光镜观察视神经形态，行图像分析和轴突纤维计数，观察视网膜各层超微结构改变、微血管变化以及糖尿病视神经退行性变并且评估BDNF的治疗作用。
结果：
1.使用STZ诱导正常大鼠建立糖尿病模型稳定，所有造模成功大鼠均出现多饮、多食和多尿等糖尿病表现。对照组大鼠血糖值始终处于正常范围平均6.66±0.54mmol/l，糖尿病大鼠血糖值升高并稳定在22.56±8.64mmol/l左右；对照组大鼠体质量随周龄明显增加，糖尿病组大鼠体质量随周龄增加反而有所下降。
2.多焦视网膜电图显示糖尿病早期视网膜各区域出现功能性改变，表现为总和波的a、b波潜伏期延长，幅值和波幅密度降低，治疗组有所改善。0环，1环，2环，3环，4环的a、b波潜伏期延长，颞上、颞下、鼻上、鼻下四象限的a、b波潜伏期延长。
3.电镜结果显示：糖尿病与对照组相比视网膜全层均有异常表现：膜盘排列结构模糊，局部间隙溶解、甚至消失。外核层细胞体干枯变形，染色质聚集浓缩，内核层散在可见固缩细胞，内网状层可见细胞水肿，界限不清，分布不均匀：神经节细胞胞膜不完整，胞浆水肿，部分线粒体萎缩，偶见染色质聚集。血管内皮细胞肿胀，基底膜普遍增厚，水肿的神经细胞压迫周围微血管，管腔狭窄闭塞；BDNF治疗组细胞膜完整，细胞水肿减轻，部分细胞器退变，线粒体仍肿胀，但与糖尿病组相比均有明显改善。
4.糖尿病与对照组相比，视神经纤维排列紊乱、数量减少、间质明显增多。BDNF治疗组比糖尿病组有明显改善，视神经纤维密度正常值为(0.0102±0.0018)个/um2，糖尿病组纤维密度明显下降为(0.0039±0.0007)个/um2，使用神经营养因子治疗后为(0.0052±0.0009)个/um2，三组之间两两比较均有显著差异p<0.01。神经纤维数量三组之间也有显著差异p<0.01。
5.Occludin免疫荧光显示：正常毛细血管内皮细胞Occludin为连续分布，而4糖尿病一月组毛细血管Occludin荧光染色明显减弱，同时在动脉管壁上呈颗粒状沉积，蛋白分布不均匀，BDNF治疗组可见有明显改善。
结论：
1.糖尿病早期视网膜mfERG已有异常，mfERG是DM早期视网膜功能和结构异常敏感而可靠的指标，并能反映出药物治疗的效果。
2.糖尿病视网膜病(DR)是一种多因素影响的疾病，糖尿病早期视网膜存在神经退行性改变和微血管的渗透性增加，两者共同导致视网膜病变的发生发展。
3.脑源性神经营养因子能够改善视网膜神经细胞，胶质细胞的结构和功能，减轻微血管渗透性，加强血一视网膜屏障(BRB)功能，减慢神经网膜和微血管的损伤，能从多个方面对糖尿病视网膜病变进行治疗。