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异黄酮类物质最先由植物中提取出来,由于与雌激素结构类似,因此可以参与机体的代谢,是一种天然化学药物。目前经研究证实了异黄酮类物质具有抗炎方面的活性。市面上使用的临床抗炎药大多属于类固醇和环氧酶抑制剂,但是这类药物对胃肠道和肾脏存在一定的毒性反应。因此,寻找天然化合物或修饰的天然化合物成为了新的抗炎药物发展方向。 羽扇豆怀特酮是一种来自于白羽扇豆的异黄酮类物质,其抗炎活性及作用机制尚没有文献报道。在本课题中,该化合物的抗炎活性及在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用机制得到初步研究,并在小鼠炎症模型中进行验证。本课题使用脂多糖刺激小鼠巨噬细胞 RAW264.7构建炎症细胞模型,以MTT检测羽扇豆怀特酮的毒性,首先用ELISA和Griess Kit分别检测炎症状态下细胞产生的TNF-α和NO,初步鉴定其抗炎活性;其次,进一步的用 PCR检测其对炎症因子 COX-2,iNOS,TNF-α,IL-1β和IL-6mRNA的抑制作用;再次,以western blot、免疫荧光来探究羽扇豆怀特酮对巨噬细胞RAW264.7细胞中的NF-κB和MAPKs炎症应激通路调节;最后,以western blot、免疫荧光和转染来探究羽扇豆怀特酮对Nrf2及其与ARE和下游HO-1的调节,从而初步阐明了羽扇豆怀特酮通过抑制了 NF-κB和 MAPKs通路而减缓炎症,同时促进 Nrf2来增强抗炎能力,并且在小鼠炎症肿胀模型中也表现出了消肿抗炎的效果。结果发现:(1)羽扇豆怀特酮可以明显抑制脂多糖诱导的炎症因子表达,对NO的半数抑制浓度为7.7μM,对TNF-α的抑制率为36.1%;(2)羽扇豆怀特酮通过抑制NF-κB上游的 IκBα的磷酸化从而抑制了 NF-κB的核转移;(3)在脂多糖激活的MAPKs通路中,羽扇豆怀特酮对ERK和JNK抑制程度较强,并对其抑制表现出时间依赖性;(4)羽扇豆怀特酮促进了 Nrf2的核转移,并且增强了ARE的表达继而使下游的HO-1表达增加;(5)HO-1抑制剂的加入促进了炎症因子的释放,经羽扇豆怀特酮处理后其炎症因子再次被抑制,进一步证实了其对HO-1的促进作用;(6)动物实验表明羽扇豆怀特酮抑制了炎症引起的肿胀,给药剂量为20mg/kg情况下,1 h和2 h后的肿胀抑制率分别为26.42%和11.88%。 通过以上研究,我们发现了羽扇豆怀特酮可以抑制以 NF-κB和MAPKs为主的炎症促进通路,同时增强了Nrf2为主的细胞保护因子,初步探讨了羽扇豆怀特酮的抗炎通路研究,为人们进一步了解异黄酮物质的抗炎活性提供依据。