快速紫外线/核黄素角膜胶原交联治疗圆锥角膜和细菌性角膜炎的基础和临床研究

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目的:①评估跨上皮快速紫外线/核黄素角膜交联法(Tra-CXL)和跨上皮传统紫外线/核黄素角膜交联法(TT-CXL)交联兔角膜后不同时期组织病理学和生物力学特征改变情况。并与Acc-CXL做相应对照研究。②对比Acc-CXL和Tra-CXL临床治疗圆锥角膜的临床效果。③观察去上皮快速紫外线/核黄素角膜交联法(Acc-CXL)在细菌性角膜炎中的疗效和作用机制,对Acc-CXL联合药物、单纯药物及单纯Acc-CXL三种治疗方法进行对比。  方法:①健康新西兰大白兔42只,随机分为3组,分别采用 Acc-CXL、Tra-CXL和TT-CXL交联兔眼角膜,于术后1天、7天和30天取兔眼角膜,行组织病理学(HE、Masson、?-catenin、CD34,TUNEL)检查和生物力学特征评估。②圆锥角膜患者54人,69眼。其中29例患者36眼,行Acc-CXL治疗;25例患者33眼,行Tra-CXL治疗。分别于术前、术后1个月、3个月、6个月和12个月,通过视力、屈光状态、眼前节形态参数、生物力学参数、内皮细胞密度和共聚焦显微镜检查,评价两种交联方法的临床治疗效果。③新西兰大白兔60只,角膜基质注射金黄色葡萄球菌,制作感染性角膜炎模型,随机分为4组,分别采用Acc-CXL联合药物、单纯药物及单纯Acc-CXL方法处理实验眼和对照组,并分别于术后1天、7天和30天取兔眼角膜,进行相关临床及实验室检查。  结果:①交联术后,HE染色3组均致角膜水肿,Acc-CXL组角膜基质水肿反应最重;Masson染色三组角膜胶原初期排列紊乱,后逐渐恢复。三组角膜上皮细胞?-catenin和基质细胞CD34表达均下降,后逐渐恢复,1月时?-catenin达正常水平。三组均造成角膜基质细胞凋亡,Acc-CXL组凋亡深度最深。三组均未见角膜内皮细胞损伤。三种交联方法均能有效增强兔角膜力学强度, Tra-CXL和 TT-CXL法作用效果相似,均略弱于 Acc-CXL组。②术前和术后12个月,Acc-CXL和Tra-CXL组间对比,大多数参数无明显差异。术后12个月两组裸眼和矫正视力,角膜曲率和等效球镜度均较术前改善。两组散光度数,生物力学特征,角膜最薄点厚度和内皮细胞密度,术前和术后12个月均未见明显差异。共聚焦显微镜显示,术后1个月两组前基质内均可见大量凋亡基质细胞和基质水肿样改变,术后3个月开始恢复可见活化的基质细胞,术后12个月,两组均已基本恢复到术前水平。Acc-CXL组术后术眼刺激症状明显,并且术后haze发生率约11.11%,Tra-CXL组术眼仅轻微不适感,未出现haze表现。③裂隙灯观察兔眼造模后均能造成角膜溃疡,各组无明显差异。术后30天Acc-CXL联合抗菌药物治疗效果,溃疡评分最低为3.63±1.07。术后各时期 ELISA标记TGF-β1、TGF-β2、IL-6、CollagenⅠ和CollagenⅣ含量;PCR标记TGF-β1、TGF-β2、Smad4、CollagenⅠ、a-SMA mRNA的表达量结果显示,Acc-CXL联合抗菌药物效果最佳,单纯抗菌药物治疗组次之。  结论:①交联后兔角膜上皮和基质的形态学和生物化学特征均有明显改变,角膜内皮均未见损伤。3种交联方法均可有效增强兔角膜的生物力学强度, Tra-CXL和TT-CXL两组增强效果无显著差异。② Acc-CXL法与Tra-CXL法术后12个月视力和角膜形态改变相似,两种交联方法均达到临床应用的有效性和安全性。Tra-CXL术后刺激症状轻。③ Acc-CXL联合抗菌药物治疗能有效治疗金黄色葡萄球菌性角膜炎,治疗效果好于单纯用药组和单纯Acc-CXL组。
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