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目的:①评估跨上皮快速紫外线/核黄素角膜交联法(Tra-CXL)和跨上皮传统紫外线/核黄素角膜交联法(TT-CXL)交联兔角膜后不同时期组织病理学和生物力学特征改变情况。并与Acc-CXL做相应对照研究。②对比Acc-CXL和Tra-CXL临床治疗圆锥角膜的临床效果。③观察去上皮快速紫外线/核黄素角膜交联法(Acc-CXL)在细菌性角膜炎中的疗效和作用机制,对Acc-CXL联合药物、单纯药物及单纯Acc-CXL三种治疗方法进行对比。 方法:①健康新西兰大白兔42只,随机分为3组,分别采用 Acc-CXL、Tra-CXL和TT-CXL交联兔眼角膜,于术后1天、7天和30天取兔眼角膜,行组织病理学(HE、Masson、?-catenin、CD34,TUNEL)检查和生物力学特征评估。②圆锥角膜患者54人,69眼。其中29例患者36眼,行Acc-CXL治疗;25例患者33眼,行Tra-CXL治疗。分别于术前、术后1个月、3个月、6个月和12个月,通过视力、屈光状态、眼前节形态参数、生物力学参数、内皮细胞密度和共聚焦显微镜检查,评价两种交联方法的临床治疗效果。③新西兰大白兔60只,角膜基质注射金黄色葡萄球菌,制作感染性角膜炎模型,随机分为4组,分别采用Acc-CXL联合药物、单纯药物及单纯Acc-CXL方法处理实验眼和对照组,并分别于术后1天、7天和30天取兔眼角膜,进行相关临床及实验室检查。 结果:①交联术后,HE染色3组均致角膜水肿,Acc-CXL组角膜基质水肿反应最重;Masson染色三组角膜胶原初期排列紊乱,后逐渐恢复。三组角膜上皮细胞?-catenin和基质细胞CD34表达均下降,后逐渐恢复,1月时?-catenin达正常水平。三组均造成角膜基质细胞凋亡,Acc-CXL组凋亡深度最深。三组均未见角膜内皮细胞损伤。三种交联方法均能有效增强兔角膜力学强度, Tra-CXL和 TT-CXL法作用效果相似,均略弱于 Acc-CXL组。②术前和术后12个月,Acc-CXL和Tra-CXL组间对比,大多数参数无明显差异。术后12个月两组裸眼和矫正视力,角膜曲率和等效球镜度均较术前改善。两组散光度数,生物力学特征,角膜最薄点厚度和内皮细胞密度,术前和术后12个月均未见明显差异。共聚焦显微镜显示,术后1个月两组前基质内均可见大量凋亡基质细胞和基质水肿样改变,术后3个月开始恢复可见活化的基质细胞,术后12个月,两组均已基本恢复到术前水平。Acc-CXL组术后术眼刺激症状明显,并且术后haze发生率约11.11%,Tra-CXL组术眼仅轻微不适感,未出现haze表现。③裂隙灯观察兔眼造模后均能造成角膜溃疡,各组无明显差异。术后30天Acc-CXL联合抗菌药物治疗效果,溃疡评分最低为3.63±1.07。术后各时期 ELISA标记TGF-β1、TGF-β2、IL-6、CollagenⅠ和CollagenⅣ含量;PCR标记TGF-β1、TGF-β2、Smad4、CollagenⅠ、a-SMA mRNA的表达量结果显示,Acc-CXL联合抗菌药物效果最佳,单纯抗菌药物治疗组次之。 结论:①交联后兔角膜上皮和基质的形态学和生物化学特征均有明显改变,角膜内皮均未见损伤。3种交联方法均可有效增强兔角膜的生物力学强度, Tra-CXL和TT-CXL两组增强效果无显著差异。② Acc-CXL法与Tra-CXL法术后12个月视力和角膜形态改变相似,两种交联方法均达到临床应用的有效性和安全性。Tra-CXL术后刺激症状轻。③ Acc-CXL联合抗菌药物治疗能有效治疗金黄色葡萄球菌性角膜炎,治疗效果好于单纯用药组和单纯Acc-CXL组。