雷公藤为卫矛科雷公藤属植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.的干燥去皮根,是迄今为止免疫抑制作用最可靠的中药之一。雷公藤制剂是以雷公藤提取纯化后的脂溶性混合物为原料制成的一种中药制剂,现市售产品有雷公藤片、雷公藤总萜片、雷公藤多苷(甙)片等,具有多种免疫抑制作用和非特异性抗炎作用,临床用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮以及肾病综合征等疾病,疗效确切。近年来,雷公藤制剂在各种原发性和继发性肾炎等疾病方面的治疗备受关注,如对慢性肾小球肾炎、过敏性紫癜性肾炎(HSPN)、狼疮性肾炎(LN)等疾病的治疗,雷公藤制剂能显著改善多种肾脏病患者的预后。但其在发挥疗效的同时,又显示出显著的毒性,其中肾脏是其主要毒性靶器官之一,而目前雷公藤制剂引起肾毒性的物质基础尚不清楚,缺乏科学有效的质控指标和方法,导致生产过程中无法控制主要毒性成分的含量,从而影响制剂质量安全。因此如何降低或控制雷公藤制剂毒性,研究出安全有效的雷公藤制剂具有广阔的发展前景。本文对雷公藤多苷片进行了血清药理学研究和血清药物化学研究,旨在进一步阐述雷公藤多苷产生肾毒性的物质基础。论文共分为4个章节,主要内容如下:第一章雷公藤多苷片指纹图谱的建立本研究采用高效液相色谱法对3个不同批次的雷公藤多苷片进行指纹图谱分析,并通过“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)”进行相似度评价,共确定了19个共有峰,方法学考察结果表明仪器精密度、实验方法的重现性均较良好。3批样品指纹图谱的相似度为0.94,相似度较高,表明不同批次雷公藤多苷片的含量稳定可控,为下一步药理实验供给合格药品提供依据。第二章雷公藤多苷片血清药理学研究采用血清药理学方法,考察了不同大鼠空白血清、DMSO用量对细胞活性的影响,并对实验动物口服给药剂量以及血清加入培养体系的方式进行了研究,最终确立了将雷公藤多苷片提取物(临床等效剂量的100倍)灌胃给予比格犬并采血,不同时间点下的含药血清经乙腈沉淀蛋白,残渣以1%DMSO完全培养液复溶后加入人肾上皮细胞(HK-2)、人肾小球系膜细胞(HMC)、人肾小球内皮细胞(HRGEC)培养体系中进行毒性实验,并采用MTT比色法测定含药血清对3种细胞增殖的抑制作用。实验结果表明,与空白血清(0 h)相比,3 h后的含药血清对细胞增殖的抑制作用明显增大(p<0.05)。第三章雷公藤多苷片血清药物化学研究采用血清药物化学方法,利用高效液相-质谱联用技术对含药血清的入血成分进行分析。共提取了94个色谱峰,104个化合物,其中82个峰来源于原型药物,12个为代谢产物峰,初步鉴定了70个化合物。第四章基于偏最小二乘法的含药血清的谱毒关系研究利用偏最小二乘回归分析法,以不同时间点含药血清指纹图谱峰的峰面积为“X”,以细胞的增殖抑制率为“Y”,建立各时间点含药血清中各移行成分含量与毒性强弱之间的关联,通过软件给出的标准回归系数及VIP值确定毒性成分,得出对HK-2细胞的主要毒性峰为B89(未知化合物)、B79(未知化合物)、B86(未知化合物)、B21(tripterygiumine L,二萜生物碱)、B77(未知化合物)、B72(未知化合物),对HMC细胞的主要毒性峰为B91(triptobenzene H,二萜类)、B94(未知化合物)、B93(triptobenzene A或triptoquinone D或triptobenzene M,二萜类),对HRGEC细胞的主要毒性峰为B80(未知化合物)、B89(未知化合物)、B88(未知化合物)、B39(未知化合物)。本论文的开展基本阐明了雷公藤多苷片的肾毒性物质基础,为建立科学的雷公藤制剂质量控制方法、指导生产工艺优化、实现增效减毒提供指导。