柚皮苷对脂多糖刺激成骨细胞碱性磷酸酶活性和OPG、RANKL的影响

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目的牙周炎是一种慢性炎症型疾病,以牙周支持组织的破坏为特征,尤其造成牙槽骨的吸收,同时也是导致牙齿脱落的最主要原因。在中国牙周炎的发病率居高不下,多常见于成年人,牙周炎已然成为影响人们口腔问题的最主要因素。牙周炎的治疗不仅要清除菌斑微生物保持良好的口腔卫生,还要重建缺损组织、恢复牙齿咬合功能。柚皮苷是骨碎补的主要有效成分,对治疗骨质疏松症疗效显著,同时也具有一定的抗炎作用。柚皮苷对成骨细胞具有增殖作用,可上调成骨相关因子的表达;在牙周骨缺损条件下,柚皮苷会促进新骨形成。但是关于柚皮苷在炎症情况下成骨情况及相关机制研究还较少,所以本研究以体外脂多糖刺激下的MC3T3-E1细胞为实验模型,采用不同浓度的柚皮苷为研究对象,观察不同浓度柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖情况和成骨的影响及研究柚皮苷在炎症条件下抑制骨吸收的机制,为进一步将柚皮苷应用于治疗牙周炎造成的骨吸收提供理论基础。方法将原代MC3T3-E1细胞进行传代培养完成后,取第3代细胞,随机分为对照组和实验组。其中,实验组:按加入药物和柚皮苷浓度的不同将细胞分成四组:脂多糖组:终浓度为1μg/m L脂多糖;低浓度柚皮苷组:终浓度为2 mg/L柚皮苷+1μg/m L脂多糖;中浓度柚皮苷组:终浓度为10 mg/L柚皮苷+1μg/m L脂多糖;高浓度柚皮苷组:20 mg/L柚皮苷+1μg/m L脂多糖;空白对照组:加入等量的二甲基亚飒,未做其它处理。24h后CCK-8检测成骨细胞增殖情况,3天后检测碱性磷酸酶活性以及采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测成骨细胞骨保护素(OPG)和核因k B受体活化因子配体(RANKL)m RNA表达水平。使用SPSS21.0统计软件进行分析数据。结果与对照组相比,脂多糖组成骨细胞增殖能力下降,碱性磷酸酶活性降低,OPG m RNA水平下降,RANKL m RNA水平升高(P<0.05)。与脂多糖组相比,柚皮苷各浓度组均可促进成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,上调OPG m RNA水平,降低RANKL m RNA水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。柚皮苷各浓度组比较,2 mg/L柚皮苷溶液促进成骨活性和抑制骨吸收能力最为显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论柚皮苷可促进脂多糖刺激下的MC3T3-E1细胞的增殖分化,提高碱性磷酸酶活性,上调OPG m RNA水平,下调RANKL m RNA水平,并且当柚皮苷浓度为2 mg/L时效果最为显著,所以柚皮苷可能通过上调OPG表达水平,下调RANKL表达水平,进而抑制骨吸收,提高成骨细胞成骨活性。
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