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自1995年以来,我省杏产区陆续发现杏黑斑病危害致病,虽采取一定措施,但因未从病原鉴定入手,疗效甚微,致使该病害日益加重。查阅文献资料,未见国内外对此病有系统研究利报道。对该病害的病原菌经过从致病性、形态、生态、分子生物学4个层次的研究,鉴定病原为杏链格孢Alternaria armeniacae T.Y.Zhang,M.Zhang et W.H.Yang,该菌为链格孢属的一个新种。 目前仅在红玉杏和巴旦杏上发现杏果实黑斑病。杏的枝干、叶片均不表现症状,仅在果实上表现症状。大部分病果在果实顶部先发病,形成圆形或不规则形病斑,φ=3~8mm,黑褐色,病部表层组织木质化坏死,干硬,仅局限于表皮,不深入果肉,不腐烂。病健交界处易开裂,伤口处常流胶,病斑易剥离,果肉风味不变。单个病果上常发生几个至几十个病斑,病斑之间联合成片,果实商品价值极低。 本研究首先对果实进行套袋明确果实发病为外来病原物侵染所致。然后根据柯赫氏证病率对分离自病部的病原菌进行研究。描述自然发病的病斑上以及PCA+滤纸上分生孢子、分生孢子梗及喙的形态,测量其大小,观察分生孢子链的立体结构。生物学特性部分研究了温度、光照、pH值、不同碳氮源对杏果实黑斑病菌菌丝生长和孢子萌发的影响。结果表明该菌的适应范围很广,在8~45℃范围内病菌可以生长和萌发,在pH 3~11范围内可以生长。菌丝生氏最适温度利分生孢子萌发最适温度分别为28℃和30℃;菌丝生长最适pH为5.78;光照促进分生孢子萌发;以蛋白胨或酵母汁为氮源,淀粉或乳糖为碳源适宜菌丝生长。 采用CTAB法提取9株Alternaria armeniacae以及米白其它5个链格孢种的19株菌株的DNA,采用来自3个不同种菌株的DNA筛选引物,共筛选出10条带型清晰、多态性奸的10碱基寡核苷酸随机引物。用这10条引物对供试菌株的DNA进行PCR扩增,得到157条清晰的DNA谱带。分析各凶株DNA谱带特征,并利刚UPGMA软件对分属于链格孢属6个种的28个菌株进行聚类分析。虽然各菌株的遗传背景差异明显,但其亲缘关系十分接近,当遗传距离大于6.7时,各菌株即聚为一类。AX1~AX9在遗传距离为4.7时聚为一组,进一步证明分离自杏果实黑斑病的病原菌为不同于其它种的一独立群体,是一新种,为形态鉴定提供了用力的辅助依据。分离白红玉杏利巴旦杏的病原菌在遗传组成上无明显差异,与致病性测定一致。 杨怵中:杏旱一叹斑仙n引6鉴定沾们关链冰他扬的*APD讣折 A.allc/)flit、A.lollglp。S 分敞丁不同聚类组中:A.I。。Ill与A.lit。I·Illnl 以及A人。,。且lp。。与。1c;人。,·,;.;m生社近们巡传距冯内灭八一组,说明能格地属忡W仟仙丕传分化现象,山暗示种级分类可能过细。地理来源相距较远的凶株在聚类图中山们UIZ妆吐,大明MPD图谱4、7N与地工卫卡洲何一无相大性。 本研究灯次证实杏果实黑斑病为洲BJR发生病害,其病原凶为杏旺格泡 乡Aft。I·11l11、I。I(I,,,Ill;I工CCC TYZllalg,M.ZI。allg et Wll.lhng,升在DNA水平上研究该凶与相大凶的朵缘关系,为该炳的诊断、防治、致病机理、抗病育种等进一步研究徙供依W。根据sPD图谱,株卜J了链裕地种问及种内的亲缘关系、遗传分化,为链格抱的分类鉴定提供依据。