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目的： 本实验通过慢病毒介导的shRNA稳定沉默HL-60细胞RYBP基因表达，观察RYBP抑制后HL-60细胞的增殖与凋亡情况，初步探讨RYBP基因在急性白血病发生发展中的功能。 方法： 1.采用购买Sigma公司的有效沉默人RYBP的shRNA慢病毒和对照慢病毒，直接用来感染 HL-60细胞，72h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）的表达以监测感染效率，通过嘌呤霉素抗性筛选获得持久稳定的RYBP基因沉默细胞株，用Western blot实验检测各实验组HL-60细胞RYBP表达情况，五条靶向RYBP基因shRNA中初步筛选出干扰效果最佳的一条shRNA进行后续研究。 2．经筛选出的shRNA用于干扰实验，干扰组和对照组慢病毒分别感染HL-60细胞后，嘌呤霉素选择压力下，筛选出稳定 RYBP基因沉默 HL-60细胞经扩大培养后，荧光定量PCR和Western blot验证RYBP基因的稳定沉默效果，应用CCK-8法绘制细胞的增殖曲线，流式细胞术Annexin V-PE/7-AAD双染色法分析细胞的凋亡情况。 结果： 1.慢病毒感染72h后于倒置荧光显微镜下观察，空载组和RYBP shRNA1～RYBP shRNA5组可见较多细胞发绿色荧光，阴性对照组不携带GFP基因，无绿色荧光。 2.各组HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功，Western blot结果示RYBP的相对表达量与未感染组（1.382±0.031）相比，五条shRNA均能不同程度减低RYBP的表达水平，以RYBP shRNA2组沉默效果最为显著（0.03±0.006，P＜0.01），而对照组之间 RYBP表达无明显差异（P＞0.05）。选择 RYBP shRNA2（即TRCN0000007944）作为后续的实验研究。 3.筛选出的RYBP基因沉默 HL-60细胞经扩大培养，荧光定量 PCR和Western blot结果示RYBP shRNA组（即TRCN0000007944）RYBP基因的mRNA和蛋白相对表达量与未感染组比较，分别为（0.04±0.01） vs（1.00±0.00）、（0.03±0.031） vs（1.41±0.03），表达差异均有统计学意义（P＜0.05）。证实RYBP shRNA作用于HL-60细胞后能有效抑制RYBP基因表达，且慢病毒携带的shRNA能整合到HL-60细胞基因组中从而稳定沉默RYBP基因。 4.RYBP基因表达沉默后，HL-60细胞的增殖能力明显提高，且细胞凋亡被抑制，早期凋亡率较未感染组减低了约78.11％（P＜0.01），即（2.19±0.40）%vs（9.22±1.05）%，而对照组之间细胞早期凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论： 1.慢病毒载体携带的外源基因能有效整合到受感染的HL-60细胞基因组中，通过嘌呤霉素抗性筛选获得持久稳定的RYBP基因沉默细胞株，且RYBP shRNA在体外能特异性稳定抑制HL-60细胞RYBP基因的mRNA和蛋白表达水平。 2.RYBP基因表达抑制后促进 HL-60细胞的增殖和抑制细胞凋亡，说明HL-60细胞内RYBP高表达促进细胞凋亡，具有肿瘤抑制效应，且RYBP促进白血病细胞凋亡的具体作用机制有待深入研究。