【摘 要】
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目的:1、克隆人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)基因的核心启动子,并构建hTERT基因核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞和正
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目的:1、克隆人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)基因的核心启动子,并构建hTERT基因核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中表达的差异。2、将HSV-tk基因定向插入到hTERT基因核心启动子下游,检测HSV-tk基因是否在肿瘤细胞中特异性表达。 方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子。将其插入荧光素酶报告载体中,经限制性内切酶Sac Ⅰ、Hind Ⅲ酶切和PCR鉴定后,转染肿瘤细胞及正常细胞,观察两种细胞中荧光素酶基因表达的差异。以含有HSV-tk基因cDNA全长的质粒pBluescript-tk为模板扩增出tk基因,在tk基因两端加入Xba Ⅰ和Nco Ⅰ酶切位点。用限制性内切酶Xba Ⅰ和Nco Ⅰ将hTERT核心启动子调控的荧光素酶载体中的荧光素酶切除,将tk基因连接于hTERT核心启动子的下游。转染喉癌细胞系Hep-2和正常肝细胞系7702,利用RT-PCR检测tk基因的表达。 结果:hTERT基因的启动子调控的表达载体在肿瘤细胞中呈高效表
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