开口箭的生药学研究

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本学位论文以百合科植物开口箭(Tupistra chinensis Baker)为研究材料,开展了以下几个方面的研究工作:开口箭药材质量标准研究、不同产地开口箭脂肪酸成分的气相色谱-质谱比较分析、响应面法优化开口箭多糖超声提取最佳工艺研究、开口箭多糖体外抗氧化研究、高效液相色谱法测定不同产地开口箭药材中薯蓣皂苷元的含量。此外,利用ICP原子发射光谱分析仪分析检测了开口箭中矿质元素含量。主要研究结果如下:1.药材质量标准研究。按照《中国药典》(2010版)方法,分析测定了开口箭药材浸出物及灰分含量。开口箭药材冷水浸出物不得少于56.82%,热水浸出物不得少于59.38%,冷醇浸出物不得少于21.25%,热醇浸出物不得少于29.57%,挥发性醚浸出物不得少于1.16%,总灰分不得过4.77%,酸不溶性灰分不得过0.09%。开口箭药材粉末呈黄白色,淀粉粒众多,单粒类圆形或卵圆形,直径3–9μm,脐点裂缝状、点状,层纹不明显。草酸钙针晶成束或散在,长30–150μm,直径2–7μm,另可见细长柱晶及碎断的方晶。导管为螺纹、环纹导管,偶见网纹、孔纹导管,直径8–17μm。木栓细胞类圆形或不规则形,壁显著增厚,淡棕黄色。纤维成束或单个散在,壁厚。薄壁细胞类圆形,常含草酸钙针晶或淀粉粒。2.脂肪酸成分分析。采用索氏提取法分别提取产自秦巴山区陕西汉中留坝和南郑两地的开口箭根茎中脂肪酸成分,经BF3-CH3OH甲脂化处理后用气相色谱-质谱联用技术(GC-MC)分离和鉴定其成分,利用归一化法测定其各个成分的相对百分含量。两产地的开口箭含有27种共有成分,从产自秦岭南坡留坝的开口箭根茎中共分离鉴定出29种脂肪酸,主要种类有:正十六烷酸(42.815%),亚油酸(11.386%),反-油酸(6.378%),8,10-二甲氧基-十八烷酸(6.355%),正十八烷酸(4.18%),9,10,12-三甲氧基-十八烷酸(3.724%)等。从产自巴山北坡南郑的开口箭根茎中共鉴定出31种脂肪酸,主要种类有:正十六烷酸(32.404%),亚油酸(10.144%),正二十六烷酸(5.466%),8,10-二甲氧基-十八烷酸(5.418%),反-油酸(4.675%),正十八烷酸(4.664%),9,10,12-三甲氧基-十八烷酸(4.638%),9,11,13-三甲氧基-十八烷酸(4.422%),正二十二烷酸(4.234%)等。3.开口箭植物多糖研究。采用响应面法优化开口箭多糖超声辅助提取优化的工艺,优化后的开口箭多糖提取制备条件为:提取温度80℃,超声功率210W,料液比1:33(g:mL),提取时间42min,提取率达3.771%。体外抗氧化实验显示,开口箭粗多糖及精制多糖对羟自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)和2,2-二苯基-1-苦苯肼(DPPH)三种自由基均有较强的抗氧化活性。体外抗菌实验表明,开口箭多糖对金黄色葡萄球菌ATCC25925、大肠埃希氏菌ATCC25922株、枯草芽孢杆菌CMCC63501株和白假丝酵母菌CMCC850216均有明显的抑菌作用。本论文还就开口箭多糖的体外抗氧化活性和抗菌活性与开口箭浸出物的活性进行了对比研究。4.开口箭皂苷元含量研究。采用高效液相色谱法,色谱柱为InertsilODS-3(4.6mm×150mm,5μm),纯甲醇为流动相、柱温30℃、进样量10μl、检测波长210mm、进样时间10min测定不同产地开口箭中薯蓣皂苷元的含量,回归方程为Y=2.27×10~3X-4.51×10~3,r~2=0.9998,开口箭薯蓣皂苷元含量范围为0.00265%-0.0073%。5.开口箭药材中矿质元素的测定。通过ICP原子发射光谱分析仪测得陕西南郑开口箭中各矿质元素的平均含量分别为:Ni13.333mg/kg,Cu32.167mg/kg, Zn9.167mg/kg, Mn26.833mg/kg, Fe74.333mg/kg,5种矿质元素含量从大到小顺序为: Fe>Cu>Mn>Ni>Zn。留坝开口箭中各矿质元素的平均含量为:Ni:29.500mg/kg,Cu:62.500mg/kg, Zn:10.667mg/kg, Mn:37.333mg/kg, Fe:410.000mg/kg,5种矿质元素含量从大到小顺序为: Fe>Cu>Mn>Ni>Zn。
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