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第一部分:Circ＿cse1l在结直肠癌中的表达及意义目的:通过检测来源于CSE1l基因外显子环化所形成的circ＿cse1l（hsa＿circ＿0060745）在结直肠癌组织和正常的癌旁粘膜组织中以及在结直肠癌患者血清和正常人血清中的表达差异,进而分析circ＿cse1l的表达量与结直肠癌患者临床病理参数的关系。方法:1.于临床上取50例结直肠癌患者的肿瘤组织以及距离肿瘤组织约10cm以外的正常粘膜组织进行HE染色鉴别。2.利用circBanK以及qRT-PCR,琼脂糖电泳技术筛选来源于CSE1L基因的环状非编码RNA。3.利用qRT-PCR技术检测结直肠癌组织和正常粘膜组织,以及结直肠癌患者血清和正常人血清中circ＿cse1l的表达情况。4.进一步统计分析circ＿cse1l的表达量与结直肠癌患者临床病理参数的相关性。结果:1.利用qRT-PCR,琼脂糖电泳技术筛选CSE1L基因形成的环状RNA,确定circ＿cse1l（hsa＿circ＿0060745）作为研究对象通过检索circBan K数据库,结果发现CSE1L基因可形成多种环状RNA,针对其中12种环状RNA设计跨环化位点引物,并进行qRT-PCR检测,发现circ＿cse1l（hsa＿circ＿0060745）在结直肠癌组织中表达相对稳定,且表达量相对较高。所以选择其作为研究对象。2.Circ＿cse1l在结直肠癌组织和血清中的表达明显降低qRT-PCR检测结果发现,与对照组相比,circ＿cse1l在结直肠癌组织以及血清中的表达量均明显下降,且表达差异具有统计学意义（P<0.05）。3.Circ＿cse1l的表达水平与肿瘤的浸润深度呈负相关利用t检验进一步分析circ＿cse1l表达量与结直肠癌患者临床病理资料之间的关系。发现circ＿cse1l的表达水平与肿瘤的浸润深度呈负相关关系（P<0.05）。与此同时发现,circ＿cse1l的表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移、以及肿瘤的发生部位无明显相关性。小结:Circ＿cse1l在结直肠癌组织以及血清中的表达量明显降低,且其表达水平与肿瘤的浸润深度呈负相关,可在一定程度上评估结直肠癌患者的预后。第二部分:Circ＿cse1l对结直肠癌细胞株生物学行为的影响目的:通过在肿瘤细胞株中过表达circ＿cse1l,进而探究其对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭等方面能力的影响。方法:1.qRT-PCR技术检测circ＿cse1l在人正常结肠粘膜细胞系FHC,以及结肠癌细胞系HT29、HCT116及Lo Vo中的表达。2.利用质粒pcDNA3.1构建circ＿cse1l的过表达载体,进一步用Lipo8000TM转染试剂转染HT29、HCT116细胞系,qRT-PCR检测转染效率。3.CCK-8、平板克隆实验、划痕实验以及Transwell小室迁袭实验检测过表达circ＿cse1l后对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果:1.Circ＿cse1l在肿瘤细胞中的表达低于正常结肠粘膜上皮细胞Circ＿cse1l在肿瘤细胞系HT29、HCT116及Lo Vo中的表达均明显低于其在细胞系FHC中的表达,且差异有统计学意义（P<0.05）。2.在细胞系HT29、HCT116中成功过表达circ＿cse1l对过表达质粒转染的HT29、HCT116细胞进行检测,发现与对照组相比,过表达组中的circ＿cse1l的表达明显升高（P<0.05）。3.过表达circ＿cse1l可以抑制结直肠癌细胞的增殖能力CCK-8实验结果发现,与对照组相比,过表达circ＿cse1l后,HT29、HCT116细胞的增殖活力得到抑制。平板克隆实验则发现,过表达组的细胞克隆数明显减少（P<0.05）。以上实验表明circ＿cse1l可以明显抑制结直肠癌细胞的增殖能力。4.过表达circ＿cse1l可以抑制结直肠癌细胞的迁移、侵袭能力细胞划痕实验结果表明:与对照组相比,过表达组细胞生长缓慢,细胞生长迁移能力得到抑制。Transwell实验结果表明:与对照组相比,过表达circ＿cse1l可以明显抑制结直肠癌细胞的迁移、侵袭能力（P<0.05）。小结:Circ＿cse1l在肿瘤细胞中的表达低于正常结肠粘膜上皮细胞,通过在HT29、HCT116细胞系中过表达circ＿cse1l,发现过表达circ＿cse1l可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。第三部分:Circ＿cse1l抑制结直肠癌细胞增殖的分子机制目的:探究circ＿cse1l可能的抑制结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:1.Western blot检测过表达circ＿cse1l后,HT29及HCT116细胞系中增殖相关蛋白PCNA的表达。2.利用数据库Circ Interactome预测circ＿cse1l的可能的结合蛋白。3.RNA-binding protein immunoprecipitation（RIP）以及qRT-PCR验证circ＿cse1l和EIF4A3的结合。4.RNA-binding protein immunoprecipitation（RIP）、qRT-PCR以及琼脂糖电泳检测过表达circ＿cse1l后,在EIF4A3抗体沉淀的RNA-蛋白复合物中PCNA的m RNA水平表达情况。结果:1.过表达circ＿cse1l可以下调PCNA蛋白的表达通过Western blot检测过表达circ＿cse1l后,HT29、HCT116细胞中PCNA的表达情况,结果发现:与对照组相比,过表达circ＿cse1l后可以下调PCNA的蛋白表达（P<0.05）。2.EIF4A3是circ＿cse1l的结合蛋白通过利用数据库Circ Interactome预测,并进一步利用RNA-binding protein immunoprecipitation（RIP）验证,证实EIF4A3是circ＿cse1l的结合蛋白,两者存在相互关系。3.Circ＿cse1l通过与EIF4A3结合下调PCNA的表达与对照组相比,过表达circ＿cse1l后,在EIF4A3抗体沉淀的RNA-蛋白复合物中PCNA的m RNA表达水平降低,且差异具有统计学意义（P<0.05）。小结:Circ＿cse1l可能是通过下调PCNA的表达,来抑制结直肠癌细胞的增殖能力。此外证实EIF4A3是circ＿cse1l的结合蛋白,circ＿cse1l可能是通过结合EIF4A3,进而下调了PCNA的表达。结论:1.Circ＿cse1l在结直肠癌组织、血清以及结直肠癌细胞系中的表达量降低,其表达水平与肿瘤的浸润深度呈负相关,可在一定程度上评估结直肠癌患者的预后。2.过表达circ＿cse1l可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。3.Circ＿cse1l可能是通过与EIF4A3的结合,下调了PCNA表达水平,进而抑制了结直肠癌细胞的增殖能力。