研究背景和目的:肾癌约占所有肿瘤的3%,其死亡率高达40%,近年来肾癌的发病率每年稳步增长2~4%,增长速度较快[1,2]。当前对于肾癌的治疗方法,虽然医学界一致认为肾癌根治术是可能治愈肾癌的一种方法[3-7],但这仅仅是对于那些临床分期处于较早阶段的肾癌有比较良好的效果。在临床上仍有相当部分的患者就诊时已出现了远处转移、静脉癌栓等晚期表现,手术不能将体内的肿瘤完全切除,手术效果不佳,病人的5年生存率不高,即使患者进行了根治性手术切除,仍然有20%-30%患者术后3年内会出现复发及转移;再加上肾癌本身对传统放、化疗并不敏感,从而使得手术无法切除的晚期肾癌患者治疗较为困难,预后较差。因此研究肾癌增殖的发生机制对应用越来越广泛的分子靶向治疗尤为必要。Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil forming protein kinase 2,Rock2)在Rho/Rock信号传导通路中起关键作用,它对肿瘤的发生发展发挥巨大的作用。而A类清道夫受体5型(Class A scavenger receptor member5,SCARA5),与全身多种肿瘤的形成、侵袭及转移等有关,被称为“低调的抑癌基因”,对肿瘤细胞的增殖起抑制作用。这两个基因作用非常广泛而重要,与人体许多肿瘤的发生发展密切相关。肾癌是一种增殖能力很强的肿瘤,我们推断Rock2很有可能通过调节SCARA5的表达来调控肾癌细胞的增殖。前期通过基因芯片筛选在肾癌细胞中降低Rock2表达可导致SCARA5表达升高。本研究首先检测Rock2在临床肾癌患者组织中的表达,同时回顾性分析这些肾癌患者的临床特点及预后,从而分析Rock2与肾癌患者生存率之间的关系;其次通过体外、体力实验明确Rock2调控SCARA5表达对肾癌细胞增殖的影响;最后探讨Rock2如何调控SCARA5的分子生物学机制。方法:1、通过运用荧光定量PCR、Western blot以及免疫组织化学方法检测我院2002年1月至2010年1月行手术切除的118例肾癌组织、癌旁组织以及肾癌786-O、769-1和Caki细胞系中Rock2 mRNA及蛋白的表达水平,统计分析实验结果,电话随访肾癌患者,并回顾性分析所有患者的临床病理特点,总结出rock2表达与肾癌患者临床病理特点及生存率之间的关系;2、降低肾癌细胞中rock2的表达,利用edu和平板克隆实验观察肾癌细胞增殖能力的改变;将稳定转染shrock2的肾癌细胞株和未转染的肾癌细胞株建成裸鼠皮下人肾癌瘤模型,观察荷瘤鼠皮下肿瘤的生长变化;3、在沉默和过表达肾癌细胞中rock2的表达后运用荧光定量pcr和westernblot检测肾癌细胞中scara5mrna和蛋白表达变化;在肾癌细胞中沉默rock2表达的同时抑制scara5的表达及在肾癌细胞中过表达rock2的同时增加scara5的表达,观察rock2、scara5表达的变化以及肾癌细胞增殖能力的改变;4、利用免疫共沉淀方法证实rock2是否直接作用于scara5,westernblot及荧光素酶基因报告的实验方法证明rock2调控scara5的表达是通过β-catenin/tcf4通路来实现的。结果:1、rock2在71例肾癌组织中呈高表达(阳性率60.2%),仅在25例癌旁组织表达(阳性率21.2%);rock2的阳性表达差异与肾癌患者的年龄、性别、症状、肿瘤大小和部位、是否有肾上腺或者组织学上的血管侵犯以及肿瘤是否有坏死无关,但与肿瘤的临床分期、病理分级、危险系数以及肿瘤复发密切相关;该基因的阳性表达与肾癌患者中低生存率组密切相关。2、将shrock2转染到肾癌786-o细胞和769-1细胞中或者将rock2的特异抑制剂(y27632)加入到这两种细胞中后,肾癌细胞的增殖显著降低(p<0.05);动物实验发现沉默rock2表达转染肾癌细胞后所建立的裸鼠皮下肿瘤比空白质粒对照组转染肾癌细胞形成的皮下肿瘤在体积和重量方面都显著降低(p<0.05)。3、我们实验还发现沉默降低肾癌786-o和769-1细胞中rock2的表达后,scara5mrna和蛋白表达均明显升高(p<0.05);而稳定过表达rock2后,scara5mrna和蛋白表达明显降低。相反,降低scara5的表达能逆转沉默rock2表达引起的肾癌细胞增殖能力的降低;提高scara5的表达能逆转rock2过表达引起的肾癌细胞增殖能力的增强。4、免疫共沉淀、荧光素酶基因报告和westernblot证实在rock2调控肾癌细胞的增殖过程中rock2不与scara5直接作用,它调控scara5的表达是通过β-catenin/tcf4信号通路来实现的。结论:Rock2能够调控肾癌细胞的增殖,它的机制是通过β-catenin/TCF4通路作用SCARA5来实现的。这一机制有望为研究肾癌细胞的增殖提供新的思路,为肾癌的分子靶向治疗掀开新的篇章。