香蕉软腐病菌的基因组分析和LuxR系统功能鉴定

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gugugou
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
香蕉是世界上尤其是热带及亚热带地区非常重要的经济作物。近年来,陆续有报道在我国的广东省、云南省香蕉种植区域发现细菌性软腐病,其扩散速度快、危害性大,有逐年加重的趋势。我们前期从采自广州南沙区香蕉种植园出现软腐症状的粉蕉假茎中,分离到一株强致病力的玉米迪基氏菌(Dickeya zeae)MS2菌株。MS2菌株表现出与来自水稻的EC1菌株和同样来自香蕉的MS3菌株的表型差异,主要表现为产生一种特有的新型毒素,因此为了了解MS2菌株在基因水平上与其他D.zeae菌株的差异,同时为了对该菌的致病机理做进一步的研究,我们对D.zeae MS2的基因组进行了测序和分析,并对其重要的Lux R系统展开了深入研究。主要研究结果如下所述:1、MS2菌株的全基因组大小为4.75 Mbp,GC含量为53.44%,编码个4275个基因,含有7个r RNA,2个前噬菌体,2个CRISPR基因簇。MS2的基因组中还含有一个编码非核糖体肽合成酶(Non-Ribosomal Peptide Synthesis,NRPS)的基因簇,且这一基因簇仅在D.paradisiaca NCPPB2511和D.dadantii Ech703中有同源基因。我们对该基因簇中编码NRPS的一个关键基因C1O30_05075进行基因敲除后发现,MS2菌株产生毒素的能力完全丧失,因此我们认为该基因簇参与合成新型NRPS毒素的合成。2、鉴于Lux I-Lux R群体感应回路在软腐细菌中的重要性,我们通过同源比对的方法对MS2基因组中的Lux R基因进行同源比对查找,结果发现MS2基因组中含有两个编码合成Lux R系统的基因,其中一个与编码AHL群体感应信号的Lux I基因串联在一起,鉴于其与EC1中已鉴定的Exp IR系统的高度同源性,我们将其命名为Exp IR系统;另一个Lux R编码基因单独存在,我们称其为Lux R-solo系统。3、我们对exp I编码产物进行鉴定,发现D.zeae MS2菌株可产生AHL群体感应信号N-3-oxo-hexanoyl-homoserine lactone(3OC6-HSL)和3OC8-HSL,分别约占AHL总量的80%和20%。exp I和exp R突变体在温室接种实验中,致病力没有表现出与D.zeae MS2野生型的明显差异,但是exp I敲除突变体提高了致病菌的运动性、减少了细胞自动聚集以及蓝色色素indigoidine的产量。4、我们在Lux R-solo系统下游鉴定出了一个编码脯氨酸亚氨基肽酶(proline iminopeptidase,PIP)的基因,将之命名为pip A,因此把该Lux R编码基因命名为pip R。对pip A基因进行敲除后,发现突变体对香蕉苗的致病力明显减弱,而敲除pip R基因后对香蕉苗的致病力没有明显改变。在这个系统中,Pip A受Pip R蛋白的正向调控,且该调控作用受植物粗提物的诱导。综上所述,本文围绕一株从软腐香蕉树上分离得到的玉米迪基氏菌(Dickeya zeae)MS2菌株产开研究,对其基因组进行了组装,并且对基因功能进行了分析和验证。其中NRPS编码的非核糖体多肽合成酶能合成一种细菌毒素抑制D.zeae MS2周围生长的E.coli并对病原菌的致病力有影响。Exp R/I对致病力没有明显影响,但是敲除Exp I能明显的提高病原菌的运动性,减少细胞聚集和和蓝色色素Indigoidine的产量。Lux Rsolo基因簇中的pip A对致病力有明显影响,且能被Pip R正向调控。我们测试的植物组织提取物也进一步显示植物能对Pip R的调控有进一步诱导。以上研究为进一步了解MS2致病性的调控机理提供了科学的试验依据。
其他文献
群体感应系统和环二鸟苷酸(c-di-GMP)系统普遍存在于革兰氏阴性细菌中,参与调控细菌细胞的运动性、生物膜形成以及致病毒力等多种生物学功能。先前的研究结果表明,在新洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cenocepacia中,BDSF(Burkholderia diffusible signal factor)群体感应系统(简称BDSF系统)通过调节胞内c-di-GMP浓度以调控下游目的基
学位
全球每年约有180万人被诊断出患有肺癌,是致死率(约89%)最高的癌症之一。根据分期和地区差异,5年生存率从4%到17%不等。肺癌中的85%均为非小细胞肺癌(Non small cell lung carcinoma,NSCLC),其中肺腺癌(Lung adenocarcinoma,LUAD)是NSCLC中最常见的。大多数肺癌患者最终死于局部转移和复发,已有广泛研究报道肌动蛋白细胞骨架的调控失调是
学位
饲料是养猪生产中的最大单项支出成本,占总体养猪成本的65-80%。长期以来,改善种猪饲料利用效率是育种工作者的重点,其直接关系到养猪业的重要经济效益。在实际育种中,通常采用饲料转化效率(Feed conversion ratio,FCR)和剩余采食量(Residual feed intake,RFI)来衡量猪只的饲料利用效率。这两项指标是否准确,将直接决定猪只饲料利用效率的遗传进展。随着自动化电子
学位
单端孢霉烯族毒素是由镰刀菌等真菌产生的次级代谢产物,是食品和饲料中主要的污染性真菌毒素,其毒性强和污染广泛,严重威胁人类和动物的健康。单端孢霉烯族毒素的代表性真菌毒素为T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON),T-2毒素和DON主要通过消化道进入人类和动物体内,从而对机体产生毒性作用。肠道作为真菌毒素的首要靶器官,研究T-2毒素和DON的肠道毒理机制,是了解单端孢霉烯
学位
水田作业机械中的大量机械系统均可归结为多体系统。随着农田作业对机械系统产品动态性能要求的提高,需要对复杂机械系统进行动力学建模及验证。而多体系统动力学模型的验证往往需要对机械系统的刚体动态运动参数进行测量,包括点的位置(速度、加速度)及刚体姿态角(角速度、角加速度)等。视觉位姿测量技术作为一种非接触式位姿测量方法,具有结构简单、测量方便且测量精度高等优点,但市场上的视觉测量设备也存在价格昂贵,尤其
学位
黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1)是曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)产生的一种霉菌毒素,是黄曲霉毒素家族的成员之一,AFB1暴露与多种临床症状有关,极大的威胁了人和动物的健康。研究报道显示AFB1因在机体中具有遗传毒性、肝毒性和免疫毒性而受到社会广泛的关注。同时AFB1又是一种常见的食品和饲料中的污染物,长期摄入被AF
学位
CRISPR/Cas9基因组编辑系统是一种强大且灵活的基因修饰工具,能够精准地操纵基因元件,对基因功能的研究和加速作物遗传改良具有强大的应用前景。由于传统酿脓链球菌Cas9(Streptococcus pyogenes Cas9,SpCas9)依赖于识别的前间区序列邻近基序(Protospacer Adjacent Motif,PAM)为NGG,限制了基因组编辑和单碱基编辑的靶点选择自由度。因此开
学位
淡水藻类中,蓝藻门分布最广、污染最严重、毒性最大,尤其是能够分泌微囊藻毒素(microcystin,MC)的有毒蓝藻种。MC是肝毒素中危害最为严重的一类,且在蓝藻中已经确定了90多种异构体。MC是一类环状七肽化合物(D-丙氨酸-L-X-赤-β-甲基-D-异天冬氨酸-L-Z-ADDa-D-异谷氨酸-N-甲基脱氢丙氨酸),在已发现的MC异构体中,MC-LR、RR、YR毒性最强(L、R、Y分别代表亮氨酸
学位
基于课程标准、学生学习需求和课堂教学实际,针对目前高中英语语法教学中脱离单元主题语境的问题,以《高中英语》(上外版)必修第二册第二单元Animals为例,开展基于语篇语境的高中英语语法“4E”教学模式的实践研究,提出了在单元背景下运用语篇语料实施语法“4E”教学模式的路径及教学建议。
期刊
镉(Cd)是土壤中主要的重金属污染元素之一,具有很强的毒性和迁移性,易在植物中积累,影响植物正常的生长发育。硅(Si)是土壤中含量第二的元素,可以促进植物生长,提高植物对镉、锌、铬等多种重金属胁迫的抵抗力。狼尾草(Pennisetum)是我国华东和华南地区常见的一种牧草,具有生物量大,生长速度快,抗胁迫能力强等优点,在畜牧业生产中有着重要作用。目前关于硅对镉胁迫的抑制作用的研究已经取得了诸多进展,
学位