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【研究背景和目的】阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD)是最常见的老年痴呆类型。AD发病的病理核心是老年斑中β样淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)的沉积,神经元纤维缠结(NFTs),大脑皮层和海马区突触联系缺失等。Aβ由淀粉样蛋白前体(Amyloid precursor protein,APP)经β-分泌酶(BACE 1)和γ-分泌酶酶切后生成。Aβ易聚集形成寡聚体、纤维化、沉积为粥样斑块,对神经元造成损害,因此抑制Aβ的生成是治疗AD的关键。目前临床上AD的治疗主要是胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂等改善症状的药物,尚无特异性针对病因、预防和阻滞病情进展的药物。姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取的黄色色素,具有抗淀粉样变、抗炎、抗氧化及抑制胆碱酯酶活性等作用。体外及体内的实验证实姜黄素可以显著降低Aβ的量,抑制Aβ的聚集、纤维化和斑块形成。然而目前AD的研究中使用的大多是姜黄素复合物,其包含姜黄素(Cur)、去甲氧基姜黄素(DMC)和双去甲氧基姜黄素(BDMC)三种单体,并且有研究提出姜黄素单体Cur抑制Aβ生成的作用较姜黄素复合物及余单体明显,但姜黄素单体Cur抑制Aβ的机制尚不清楚。微小核糖核酸(micro RNAs,mi RNAs)是一类非编码的内源性小分子RNA,通过和靶基因m RNA碱基配对阻碍其翻译及降解。据报道mi RNAs可参与神经变性疾病的病理过程,能靶向于AD相关基因的3’非翻译区(3’UTR)使其翻译产物的表达受抑制。然而在AD研究中尚无姜黄素单体通过调控APP基因特异的mi RNAs而影响其靶基因产物的表达的报道。因此,本课题的研究目的是:研究姜黄素单体对sw APP HEK293细胞Aβ生成的影响及可能的初步机制,为姜黄素单体的进一步应用提供实验依据。【实验方法】设定姜黄素单体Cur的浓度梯度(2、5、10、20、40μM)作用于sw APP HEK293细胞各时间点(6、12、24h)后,采用MTT法(MTT比色法)检测细胞存活及生长,ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测Aβ40和Aβ42的水平,筛选出姜黄素的最佳作用浓度及时间点;用RT-PCR(聚合酶链式反应)检测APPm RNA的表达,Western blot法(聚丙烯酰胺凝胶电泳)检测APP蛋白的表达,q RT-PCR(实时荧光定量多聚酶链反应)检测mi RNA的表达。【研究结果】1、与对照组相比,浓度≤5μM的Cur对细胞活性无明显影响,而浓度≥10μM的姜黄素对细胞有毒性作用;2、浓度为5μM的Cur作用细胞24h后明显抑制细胞内Aβ40和Aβ42的生成,较各对照组差异有统计学意义;3、Cur对APP m RNA的表达无明显影响,但明显抑制APP蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义;4、Cur使mi R-153的表达上调,使mi R-101的表达下调,与对照组相比差异有统计学意义,而对mi R-195的表达无明显影响。5、mi R-153对APP m RNA的表达无明显影响,可在转录后水平负性调控APP蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义。【结论】1、Cur的浓度及时间为5μM、24h时,对sw APP HEK293细胞中Aβ40和Aβ42生成的抑制作用最明显;2、Cur可在转录后水平抑制APP蛋白的表达从而抑制Aβ40及Aβ42的生成;3、Cur可能通过诱导mi R-153过表达在转录后水平抑制APP蛋白的表达,从而抑制Aβ40、Aβ42的生成。