CHO细胞线粒体内有机酸的检测及相关代谢途径的研究

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本文首先建立了利用离子色谱和抑制电导检测器同时检测分析线粒体内三羧酸循环有机酸浓度的方法。 柠檬酸明显抑制了细胞的生长。与对照组相比,添加12mM柠檬酸处理组细胞的葡萄糖比消耗速率降低了37.5%,渗透压提高了9.0%,乳酸生成的量与葡萄糖消耗的量的比值增加了27%,氨生成的量与谷氨酰胺消耗的量的比值也增加了。在谷氨酰胺代谢过程中,更多的谷氨酰胺经谷草转氨酶途径生成α-酮戊二酸,参与能量代谢。柠檬酸促使细胞更多地捕获在G1期,阻碍细胞的DNA合成,进而抑制细胞增殖。 在柠檬酸脉冲培养中,柠檬酸的添加并没有提高三羧酸循环右半支“柠檬酸→α-酮戊二酸”的流量;而左半支“α-酮戊二酸→苹果酸”流量增加,苹果酸脱氢酶活性下降,表明苹果酸更多地离开三羧酸循环,补充丙酮酸,促使更多的碳源通过低效率的糖酵解途径来产生能量。胞内异柠檬酸大量消耗,胞内氨基酸只有丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺浓度上升,其它氨基酸浓度都有不同程度的下降。 在α-酮戊二酸脉冲培养中,随着α-酮戊二酸的浓度升高,三羧酸循环右半支流量下降,左半支流量增加,胞内柠檬酸和异柠檬酸的浓度下降。胞内乳酸脱氢酶的活性逐渐上升,经糖酵解途径产生乳酸的速率加快。这说明更多的碳源以低效率的乳酸脱氢酶途径产生能量。
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