基于DNA-Ag/Pt纳米簇模拟酶的比色检测方法研究

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许多双金属纳米材料都具有优异的催化活性,被称为“纳米模拟酶”,它们在许多领域中获得应用。其中,利用它们这些独特特性构建的传感检测方法,获得了广大研究者的重视。本论文基于一种新型的DNA-Ag/Pt纳米簇模拟酶,构建了针对汞离子、L-半胱氨酸和铜离子的比色检测方法。1、建立一种Hg2+检测的比色方法。以单链DNA为模板,银离子和铂离子在NaBH4还原下诱导生成了DNA-Ag/Pt纳米簇,该纳米簇具有类过氧化物酶活性,能够与Hg2+发生作用,导致纳米簇活性被抑制。通过透射电子显微镜(TEM)、动态光散射粒度分析仪(DLS)、电子自旋共振(EPR)和X射线光电子能谱仪(XPS)等多种仪器表征,分析了Hg2+和DNA-Ag/Pt纳米簇之间的作用机理。结果发现,当Hg2+浓度在10nmol/L-200 nmol/L范围内时,随着Hg2+浓度的增加,溶液在652nm处的吸光值(A652nm)逐渐下降,且呈现出良好的线性关系。基于上述Hg2+的抑制作用,所建立比色方法的检出限为3.0 nmol/L,检测线性范围为10 nmol/L-200 nmol/L。该方法操作简便,成本低,灵敏度高,选择性好,可用于自来水中Hg2+的检测。2、建立一种L-半胱氨酸(L-Cys)检测的比色方法。L-Cys能够通过巯基与DNA-Ag/Pt纳米簇结合,并抑制纳米簇的类过氧化物酶活性。通过TEM、DLS、荧光光谱仪和圆二色谱仪(CD)等多种仪器表征,可以分析L-Cys和DNA-Ag/Pt纳米簇之间的作用机理。结果发现,随着L-Cys浓度的增加,A652nm逐渐降低,在5.0 nmol/L-500 nmol/L范围内,L-Cys浓度与A652nm呈线性负相关。据此建立L-Cys浓度与A652nm的线性方程,实现了比色检测L-Cys的方法。该方法的检出限为2.0 nmol/L,可用于生物样品中L-Cys的检测。3、建立一种Cu2+检测的比色方法。巯基丙酸(MPA)能够抑制DNA-Ag/Pt纳米簇的催化活性,而MPA与Cu2+孵育后可以降低对纳米簇活性的抑制。通过TEM、EPR和能量色散X射线探测器(EDX)等多种仪器表征,可以分析MPA、Cu2+和DNA-Ag/Pt纳米簇之间的作用机理。结果发现,当MPA浓度为20μmol/L时,在10 nmol/L-100 nmol/L的Cu2+浓度范围内,Cu2+浓度与A652nm呈正相关,据此实现了Cu2+的比色检测。该方法对Cu2+的检出限为5.0 nmol/L,且灵敏度高、特异性好,能应用于实际水样中Cu2+的检测。
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