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我国是畜禽养殖大国,也是抗生素使用大国。抗生素的大量使用及滥用造成其在动物源性食品中超标严重,进而引发人体过敏反应、菌群失调、抗生素耐药等。抗生素耐药是21世纪全球面临的公共问题。为防控耐药基因产生和传播,许多国家和相关机构陆续颁布“限抗,禁抗”令。为此,持续监测抗生素在食源性食品中的残留现状具有重大意义。基于纳米材料生物标记的免疫层析技术具有灵敏度高、操作简单、分析快速、设备便携低廉等优点,特别适合基层样品的快速筛查。本研究以残留严重的β-内酰胺类抗生素和耐药危害严重的多肽类抗生素为研究对象,基于β-内酰胺类药物的受体和多肽类抗生素（粘菌素、多粘菌素B和杆菌肽）的单克隆抗体,分别建立牛奶中β-内酰胺类抗生素和多肽类抗生素的广谱性快速检测技术。选择肺炎链球菌R6的PBP2x（Thr52-Asp750）、地衣芽孢杆菌ATCC14580的Bla R-CTD（Met346-Arg601）及其突变型Bla R-CTD（I188K/S19C/G24C）,和金黄色葡萄球菌NRS128的突变型Bla R-CTD（Gly331-Gln585,N439V）受体,以N端带6×组氨酸标签形式融合表达,分别为PBP2x’、Bla R-CTD（14580）、Bla R-CTD-M（14580）、Bla R-CTD-M（NRS128）。以Amp-BSA为抗原,HRP标记抗组氨酸标签抗体为二抗,利用类似于间接竞争酶联免疫吸附法鉴定得出Bla R-CTD-M（14580）亲和力最高、稳定性最好。通过优化诱导表达条件,Bla R-CTD-M（14580）在0.2 m M IPTG,20°C诱导表达18 h下,可溶性表达量达8 mg/100 m L。以Bla R-CTD-M（14580）免疫小鼠,制备单克隆抗体6B11,亲和力常数为4.5×1010L/mol。利用35 nm金纳米粒子直接标记受体蛋白Bla R-CTD-M（14580）和先标记6B11抗体再间接标记受体蛋白Bla R-CTD-M（14580）的方法,分别制备二元和三元标记物。基于该标记物分别建立牛奶和鸡肉中β-内酰胺类抗生素残留检测的胶体金层析试纸条。其中,二元标记物的试纸条能检测牛奶中除青霉素G、阿莫西林、氨苄西林、头孢氨苄、头孢羟氨苄和头孢唑啉外的18种β-内酰胺类药物,能检测鸡肉中除头孢氨苄、头孢羟氨苄和头孢唑啉外的21种β-内酰胺类药物;基于三元标记物的试纸条能检测牛奶中包括上述药物在内的33种β-内酰胺类药物,可视化检测限或消线值均小于或等于欧盟设定的最大残留限量。分别采用戊二醛、4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯、碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺交联剂合成粘菌素（COL）、多粘菌素B（PMB）和杆菌肽（Baci）的完全抗原,并免疫小鼠制备各自的单克隆抗体。其中,COL特异性抗体1C10的IC50值为2.67 ng/m L,亲和力常数为1.9×109 L/mol;PMB特异性抗体2A2的IC50值为15.26 ng/m L,亲和力常数为8.95×108 L/mol;Baci特异性抗体4B11的IC50值为18.3 ng/m L,亲和力常数为2.6×108 L/mol;此外,COL和PMB的广谱性抗体2A6,亲和力常数为4.04×1010 L/mol,对COL和PMB的IC50值分别为4.44和4.25 ng/m L。利用荧光微球分别标记Baci和COL特异性抗体,建立牛奶中Baci和COL联合检测的荧光免疫层析试纸条。Baci和COL的消线值分别为100和50 ng/m L;定量检测限分别为7.85和1.89 ng/m L,检测线性范围分别为7.85-28.42 ng/m L和1.89-5.81 ng/m L。线性范围较窄,该方法可用于COL和Baci的定性分析。另外,基于金纳米粒子标记COL和PMB的广谱性抗体,建立牛奶中COL和PMB联合检测的胶体金免疫层析试纸条。COL和PMB的消线值分别为50和100 ng/m L;定量检测限分别为0.53和0.94 ng/m L,线性范围分别为0.53-61.48 ng/m L和0.94-480.93 ng/m L。线性范围较宽,适用于COL和PMB联合定量检测。