野山杏果肉总有机酸的分离纯化及对高血脂症的影响

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利用反相高效液相色谱同时测定新疆野山杏果肉中草酸、奎宁酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸以及富马酸10种有机酸含量。采用单因素实验及响应面试验设计优化和筛选717型阴离子交换树脂分离纯化野山杏果肉柠檬酸的最佳工艺条件。再以Vc作为阳性对照,考察其体外清除羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2·)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的能力。探讨野山杏果肉总有机酸(Total Organic Acids from Wild Apricot,TOAWA)体外抑制脂质过氧化活性的作用。研究新疆野山杏果肉总有机酸(TOAWA)对高血脂大鼠血清中脂质和抗氧化指标随时间变化而产生的影响。采用60%甲醇超声提取新疆野山杏果肉中有机酸,以Inertsil ODS-SP(250 mm×4.6 mm)C18柱为分析柱,甲醇-(NH4)H2PO4水溶液(p H=2.4)(3:97,v:v)为流动相,210 nm下检测,流动相流速0.5 m L/min,柱箱温度30℃。采用单因素实验及响应面试验设计优化和筛选717型阴离子交换树脂分离纯化野山杏果肉柠檬酸。以Vc作为阳性对照,考察其清除羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2ˉ·)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的能力。以维生素C作为阳性对照,采用硫代巴比妥酸法,观察不同质量浓度的TOAWA对卵黄脂蛋白脂质(PUFA)过氧化体系中脂质过氧化活性以及对小鼠肝脏自发性脂质过氧化、CCl4、Fe2+-Vc和H2O2诱导的脂质过氧化活性的抑制作用。高脂乳剂灌服实验大鼠180只(雌雄对半),以血脂康阳性对照组,及野山杏有机酸高、中、低三个剂量组,采用试剂盒分别测定TOAWA对20 d、40 d和60 d实验大鼠血清脂质水平和抗氧化指标的影响。10种有机酸成分色谱峰分离度良好,方法回收率为93.20%~108.26%之间,RSD<3%;检出限为0.01~0.73μg/m L;定量限为0.03~2.39μg/m L。阴离子交换树脂分离纯化野山杏果肉柠檬酸的最佳工艺条件为:717型树脂对野山杏果肉中柠檬酸组分的在2BV时吸附率最高达95.91%,在洗脱流速为0.5 BV/h,洗脱液浓度为0.5 mol/L,p H值为4时,解吸附性能较好,解吸率达82.45%。野山杏总有机酸对羟基自由基有一定的清除能力,但弱于Vc,质量浓度达到4 mg/m L时总有机酸清除超氧阴离子自由基的清除率为56%,与Vc组相当,有机酸质量浓度8 mg/ml时清除率达到97%,其清除DPPH·能力略强于Vc。TOAWA能够明显抑制卵黄脂蛋白(PUFA)过氧化体系中脂质过氧化活性,可以减轻小鼠肝脏自发性脂质过氧化、CCl4、Fe2+-Vc和H2O2诱导的肝脏脂质过氧化程度,除了对过氧化体系中的卵黄脂蛋白(PUFA)脂质过氧化抑制作用与剂量无关外,其他抑制脂质过氧化活性均呈现明显的剂量依赖性。TOAWA能显著(p<0.01)降低高血脂症大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),并显著提高(p<0.01)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,且有一定的时间依赖性,无剂量依赖性;TOAWA能升高脂肪酶(LPS)、总脂酶(LPL+HL)的活性,但不存在剂量与时间的依赖性;TOAWA能够显著提高(p<0.01)超氧过物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,并能降低(p<0.05)血清中丙二醛(MDA)含量,且存在剂量与时间依赖性。10种有机酸成分色谱峰分离度良好,对野山杏果肉有机酸提取方法的考察表明超声提取比回流提取更方便快捷有效。应用717型阴离子交换树脂分离纯化野山杏果肉中柠檬酸组分,其综合性能良好,具有良好的应用前景。野山杏总有机酸具有清除自由基能力和较强的抑制体外脂质过氧化活性的作用。表示野山杏总有机酸可能通过提高HDL-C浓度,提高机体抗氧化酶类及分解甘油三酯酶类活性,降低高血脂症大鼠血清中血脂水平,从而达到降血脂作用。
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