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共轭亚油酸(CLA)是亚油酸的立体和位置异构体混合物的总称,具有共轭双烯结构,是必需脂肪酸亚油酸的异构体。已有的研究发现,CLA具有多种药理活性,如抗癌、降低体脂沉积、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病等作用。随着人类基因组计划的实施和推进,生命科学研究已进入后基因组时代,其主要标志就是蛋白质组学的兴起。蛋白质组学是研究细胞内全部蛋白质的组成及其活动规律的科学,是在蛋白质水平上定量、动态、整体性地研究生物体,目的是从整体水平研究和分析特定生理状态下蛋白质组成、表达水平与修饰状态,以及蛋白质—蛋白质相互作用,了解蛋白质整体水平与细胞功能或疾病之间关系的科学。3T3-L1细胞是目前被广泛用于体外脂肪细胞分化研究的细胞。
本研究主要分为三大部分的实验内容,第一步是诱导分化后的3T3-L1脂肪细胞分成三组,分别是空白对照组、cis—9,trans-11 CLA组和trans-10,cis-12 CLA组,用药刺激8天后,对比观察被CLA异构体刺激后的3T3-L1脂肪细胞的形态;第二部是为各组的脂肪细胞建立和优化双向电泳方法,并在双向电泳图上找出两异构体组与空白对照组相比具有表达差异的蛋白点;最后一步是把双向电泳找出的差异蛋白点从双向电泳胶上切下,纯化后进行LC-MS测定,将所得的LC-MS图谱上传至相应的蛋白质数据库里搜索,确定差异蛋白。以高浓度CLA长时间处理经诱导分化的3T3-L1细胞后,从细胞形态上,两异构体刺激的脂肪细胞都出现部分细胞脂肪滴变小,部分脂肪细胞皱缩,胞膜外突的现象。经双向电泳共发现52个表达存在差异的蛋白质点,经LC-MS鉴定出24个有意义的蛋白点,其中UCP1,UCP3,perilipin和PPARα同时被cis-9,trans-11和trans-10,cis-12CLA下调而UCP2同时被两异构体上调。PKA、HSL、CPT-1和TNF-α只被trans-10,cis-12 CLA上调;而AMPK仅被cis-9,trans-11上调。从上述结论可得出,cis-9,trans-11 CLA对脂肪细胞能量代谢具有促进作用,但是不影响细胞凋亡、脂肪酸氧化和脂解作用。而trans-10,cis-12 CLA虽然对脂解作用无明显影响,但是却对能促进与能量代谢、诱导细胞凋亡和脂肪酸氧化相关蛋白的表达,这些变化或许是CLA减脂作用的重要原因。但是本研究还没有涉及基因组学方面,为了更深入地了解CLA产生降脂作用的原理,还应该进一步开展基因组学方面的研究。