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本文研究目的：研究天花粉蛋白(Trichosanthin，TCS)对黑色素瘤B-16细胞的作用，探讨天花粉蛋白抗肿瘤的机制。
研究方法：1.应用FITC标记TCS，在激光共聚焦扫描显微鏡下，观察FITC-TCS进入细胞的过程及其荧光强度，并用CCK-8细胞毒性实验、彗星实验及hoechst33258染核观察研究TCS的细胞毒作用。2.应用激光共聚焦扫描显微术结合特异性荧光探针Fluo-3/AM、H2DCF-DA和DAF-FMdiacetate观察TCS引起瘤细胞内钙离子、ROS和NO的变化以及ROS和NO与细胞内钙离子增加的关系。
研究结果：1.终浓度50μg/ml的FITC-TCS孵育3h时已经进入细胞，6h时FITC-TCS进入细胞量达到最高，12h时已轻度下降，3h、6h、12h组间差异有统计学意义(P＜0.01)。对照组FITC-BSA也可以进入细胞，但不同时间组间荧光强度差异无统计学意义(P＞0.05)。FITC-TCS与对照组FITC-BSA间荧光强度有差异且差异有统计学意义(P＜0.01)。2.终浓度50μg/mlFITC-TCS、TCS孵育3h、6h无论是细胞毒性试验还是DNA损伤的彗星实验都与对照组没有区别，Hoechst33258染色的核形态观察也未发现与对照组有明显区别。孵育12h后无论是TCS还是FITC-TCS组都可见明显的细胞毒作用；彗星实验可见DNA损伤后的特征性现象—彗星尾巴；Hoechst33258染色的核形态观察发现有明显的核浓缩和边集现象，出现特征性凋亡小体。3.终浓度50μg/ml的TCS可引起细胞内Ca2+、NO和ROS的生成量都快速升高，终浓度为10μM的钙离子载体A23187也可引起细胞内Ca2+、NO和ROS的生成量快速升高。与对照组HEPES缓冲液相比差异有统计学意义。
研究结论：天花粉蛋白对黑色素瘤B-16细胞具有较强毒性作用，可诱导其发生凋亡。天花粉蛋白诱导凋亡与细胞内钙、ROS和NO的增加有关。