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【目的】探讨内源性硫化氢是否参与了耐热肝癌细胞株多药耐药性的形成及其可能的机制。【方法】将普通肝癌细胞HepG-2在43℃水浴环境下培养4小时后建立耐热肝癌细胞株做为研究模型。设HepG-2细胞和HepG-2/tt细胞两组，用CCK-8法检测HepG-2和HepG-2/tt细胞对ADM、5-FU和CTX的IC50值；RT-PCR检测细胞中CBS、CSE和MPST的mRNA表达水平；利用硫化氢合酶抑制剂抑制CBS活性；利用RNA干扰技术沉默HepG-2细胞CBS的表达；Western Blot检测HepG-2和HepG-2/tt细胞中P-gp、Bcl-2和BDNF蛋白的表达情况。【结果】1.耐热肝癌细胞HepG-2/tt具有多药耐药性。建立耐热肝癌细胞株HepG-2/tt模型后，通过CCK-8法检测发现，ADM、5-FU和CTX作用于HepG-2/tt细胞72h后的IC50值分别为1.08±0.11mg/L、541.56±73.41mg/L和9086.24±698.23mg/L均明显高于对照组HepG-2细胞的0.32±0.06mg/L、19.74±2.47mg/L和1970.76±104.53mg/L(P<0.01)，明确耐热肝癌细胞株HepG-2/tt模型具有多药耐药性。2.耐热肝癌细胞HepG-2/tt中P-gp、Bcl-2和BDNF蛋白表达上调。Western Blot检测发现， HepG-2/tt细胞对比HepG-2细胞其P-gp、Bcl-2和BDNF蛋白的表达量均明显增加(P<0.01)，说明HepG-2/tt细胞具有多药耐药性细胞特征，且提示耐热肝癌细胞多药耐药性的形成可能与上调P-gp、Bcl-2蛋白和BDNF-TrkB通路的介导作用有关。3.耐热肝癌细胞中内源性硫化氢合酶mRNA表达增加。RT-PCR结果表明， HepG-2/tt细胞对比HepG-2细胞其内源性硫化氢合成酶CBS、CSE和MPST的mRNA表达量明显增加(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05)，表明耐热肝癌细胞比肝癌细胞内内源性硫化氢合酶表达增加。4.抑制内源性硫化氢的生成可以降低耐热肝癌细胞的多药耐药性。4.1AOAA抑制CBS酶活性、减少H2S的生成可以降低耐热肝癌细胞的耐药性。用内源性硫化氢合酶CBS抑制剂—AOAA抑制CBS活性后，5-FU分别作用72h后通过CCK-8法计算发现，处理后的耐热肝癌细胞的IC50值222.89±38.95mg/L，对比未加入抑制剂的耐热肝癌细胞的IC50值541.55±73.41mg/L明显降低（P＜0.01）。提示抑制内源性H2S合酶活性，减少H2S的生成能够降低耐热肝癌细胞的耐药性。4.2CBS-siRNA抑制细胞CBS基因翻译、减少内源性H2S的生成能降低耐热肝癌细胞的耐药性。利用RNA干扰技术沉默CBS基因的翻译后，测得CBS-siRNA组的耐热肝癌细胞ADM作用72h后的IC50值0.77±0.10mg/l，低于耐热肝癌细胞组的IC50值1.08±0.11mg/l，结果有统计学差异（P<0.01）。而Scram组耐热肝癌细胞ADM的IC50值1.10±0.11mg/l，与耐热肝癌细胞相比无明显差异（P>0.05）。结果同样说明抑制内源性硫化H2S的生成可以降低耐热肝癌细胞的耐药性。【结论】内源性H2S参与了耐热肝癌细胞HepG-2/tt多药耐药性的形成，其机制可能与上调P-gP、Bcl-2蛋白和BDNF-TrkB通路的介导作用有关。