第一部分：PDE4D在胰腺导管腺癌中的表达及其与患者预后的关系　　目的:　　研究磷酸二酯酶4D（Phosphodiesterase4D，PDE4D）在胰腺导管腺癌（Pancreatic Ductal Adenocarcinoma，PDAC）患者组织中的表达情况，并分析其对患者生存及预后的临床意义。　　方法：　　1.实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）、蛋白免疫印记试验（western blot）以及免疫组织化学法检测四对 PDAC患者癌及其相对应的癌旁组织 PDE4D的RNA及蛋白表达；　　2.免疫组织化学法对104例PDAC患者组织标本进行染色，检测其PDE4D蛋白的表达水平；生存分析及相关性分析对PDE4D的表达与患者临床病理及生存预后的关系进行统计学分析。　　结果:　　1. RT-qPCR、Western blot和免疫组化染色发现，胰腺导管腺癌组织中PDE4D的表达量高于其对应的癌旁组织；　　2.应用免疫组织化学法对104例确诊为 PDAC的患者标本的石蜡病理切片进行染色，统计结果表明， PDE4D的表达水平与 PDAC患者的临床分期（pTNM）（P=0.004)，肿瘤T分期(P=0.021),淋巴结转移(P=0.022)成正相关；同肝转移（P=0.038）呈负相关；　　3.通过生存分析发现，72例PDE4D高表达的患者，中位生存时间为6.5月（95％CI:7.7–11.4月），32例低表达组患者，中位生存时间14.3月（95%CI:11.5–21.2月），高表达组患者较低表达组生存时间明显缩短(P=0.003)；　　4.多因素COX回归分析显示PDE4D表达水平、肿瘤T分期、是否有淋巴结转移是影响PDAC患者预后的独立因素；　　结论:　　1.在同一 PDAC患者癌组织中，PDE4D的RNA及蛋白表达水平明显高于其相应的癌旁组织；　　2. PDE4D的高表达与PDAC患者的临床病理分期（TNM）、肿瘤的T分期以及淋巴结转移情况有关；　　3. PDE4D表达水平、肿瘤的T分期以及有无淋巴结转移是PDAC患者预后的独立影响因素；　　4. PDE4D具有成为检测PDAC患者预后标志物的潜能；　　第二部分：靶向沉默PDE4D基因对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响　　目的：　　利用小干扰RNA（siRNA）靶向下调PDE4D基因的表达，探讨PDE4D对人胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。　　方法：　　1. RT-qPCR、Western blot检测PDE4D在人胰腺癌细胞株中的表达水平；　　2.人工化学合成PDE4D siRNA及其阴性对照siRNA，并分别转染人胰腺癌 PANC-1、BxPC-3细胞株，RT-qPCR、Western blot分别检测转然后的细胞PDE4D mRNA及蛋白水平的变化。　　3. CCK-8方法检测下调PDE4D表达后，对人胰腺癌PANC-1、BxPC-3细胞增殖能力的影响。　　4. Transwell迁移实验检测下调 PDE4D表达后，对人胰腺癌 PANC-1、BxPC-3细胞迁移能力的影响。　　5. Transwell侵袭实验检测下调 PDE4D表达后，对人胰腺癌 PANC-1、BxPC-3细胞侵袭能力的影响。　　结果：　　1.在人胰腺癌 PANC-1、BxPC-3、AsPC-1、CFPAC-1细胞株中，PDE4D的mRNA及蛋白表达水平明显高于在正常胰腺组织的水平；　　2. PDE4D siRNA转染人胰腺癌PANC-1、BxPC-3细胞后，24h检测PDE4D mRNA水平下调70%以上，48h蛋白表达水平下调50%以上；　　3.与对照组（NC）相比，BxPC-3细胞株PDE4D siRNA转染组（Si）在转然后24、48、72、96小时的增殖能力明显降低；而在PANC-1细胞株中并未出现明显差异；　　4.与对照组（NC）相比，BxPC-3细胞株的PDE4D siRNA转染组（Si）细胞的迁移、侵袭能力显著降低；而在PANC-1细胞株中并未出现明显差异；　　结论：　　1.小干扰RNA靶向沉默PDE4D基因后，可抑制人胰腺癌细胞株PANC-1、BxPC-3中PDE4D mRNA及蛋白表达水平；　　2.下调PDE4D基因的表达后，人胰腺癌细胞株BxPC-3的增殖、迁移及侵袭能力明显降低；而对胰腺癌细胞株 PANC-1的增殖、迁移及侵袭能力无显著影响。