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目的:炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是由肠道微生物免疫反应失调引起的慢性病症,其发生在全部或部分肠道内。IBD由两种主要类型组成,即溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。虽然CD和UC的复杂病因学尚未明确阐明,但细胞因子产生和T细胞功能紊乱的不平衡是导致IBD发病的主要原因。其中,研究表明促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-17A(Interleukin-17A,IL-17A)分泌增加是IBD病理生理学的关键因素。灵芝的功能性作用主要有调节免疫力、抗肿瘤、抗氧化等。多糖是灵芝的最主要活性成分,除具有上述功能外,还可以抗炎、抗病毒、抗辐射。然而,目前还没有关于灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)治疗结肠炎和其免疫调节机制的功效的直接研究。在本研究中,我们构建了葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型,分析了GLP结肠炎模型的保护作用和免疫调节作用,并深入探讨了这些作用的潜在机制。研究方法:选取6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠(体重20±1g),将小鼠随机分成两组,分别为实验组(GLP+DSS组)和对照组(DSS组),每组含10只动物。在诱导肠炎之前,实验组小鼠每天灌胃GLP给予(100mg/kg;溶于0.2ml水)14天。另一组给予水做对照(0.2mL)。随后,两组小鼠饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)溶液6天。诱导实验性结肠炎模型后第7天处死小鼠。共计21d,检测以下指标变化:㈠通过观测生存率、体重和疾病活动指数(Disease activity index,DAI)评分检测临床症状。通过测量结肠长度和应用苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)检测结肠组织损伤;㈡应用流式细胞技术表面染色检测固有层淋巴细胞(Lamina propria lymphocytes,LPL)内中性粒细胞、巨噬细胞、γδT细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞、自然杀伤T(natural killer T,NKT)细胞、B细胞、T细胞、CD4~+CD44~+T细胞、CD4~+CD25~+T细胞,细胞内染色检测Th17细胞和Th1细胞;㈢应用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测LPL分泌的细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、白细胞介素-23(Interleukin-23,IL-23)、IL-17A、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的含量;㈣应用real-time PCR技术检测转录因子维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,ROR-γt)、Foxp3(forkhead box P3)、T-bet(转录因子T-box基因家族)、GATA-3(转录因子GATA基因家族)的mRNA表达。结果:1.所有口服2.5%DSS 6天的小鼠均表现出结肠炎症状,包括腹泻、体重减轻和直肠出血。表示结肠炎小鼠模型造模成功。GLP预处理阻止了DSS诱导的急性结肠炎的发展,表现出存活率上升,体重减轻减缓,结肠长度缩短减缓,结肠组织的损伤降低和疾病活动指数(Disease activity index,DAI)评分降低,结果均具有统计学意义。因此,这些结果表明GLP治疗对DSS诱导的小鼠急性结肠炎具有治疗作用。2.流式细胞术结果显示:与对照组小鼠相比,在给与GLP的急性结肠炎组中,LPL中的B220~+CD3~-细胞百分比上显著增加,而LPL中的CD3~+B220~-细胞上显著降低;LPL中CD4~+CD44~+的百分比和绝对数量显著降低;LPL中NK细胞(NK1.1~+CD3~-)和NKT细胞(NK1.1~+CD3~+)的百分比显著降低,而仅NKT细胞的绝对数统计学意义上显著降低。与对照组小鼠相比,经GLP预处理的急性结肠炎小鼠中固有层T淋巴细胞(T-Lamina propria lymphocytes,T-LPL)中产生IFN-γ或IL-17A的CD4~+T-LPL百分比和绝对数目显著降低。这些结果提示,GLP的作用可促进DSS诱导的急性结肠炎小鼠B细胞的增殖,调节Th1,Th17和Th2细胞应答并抑制结肠LPL中NK细胞和NKT细胞的增殖。3.ELISA结果显示:与对照组相比,经GLP预处理的急性结肠炎组中LPL培养上清液中TNF-α,IL-1β和IL-6的水平统计学意义上显著降低。与对照组相比,在GLP治疗的急性结肠炎组中用抗CD3和抗CD28抗体刺激及未经任何刺激的LPL培养上清液中IL-17A水平统计学意义上显著降低。与对照组相比,GLP处理的急性结肠炎组中用抗CD3和抗CD28单克隆抗体刺激的LPL培养上清液中IL-4的水平统计学意义上显著降低。4.Real-time PCR结果显示:GLP使结肠炎小鼠结肠组织中ROR-γt表达减少。然而,它并没有使Foxp3、T-bet和GATA-3表达有任何改变。这些结果表明GLP通过抑制其分化来抑制th17细胞应答。结论:1.GLP减轻小鼠中DSS诱导的急性结肠炎。2.GLP抑制DSS诱导的急性结肠炎小鼠的结肠固有层中的Th17介导的细胞应答。3.GLP显著降低DSS诱导的急性结肠炎小鼠的结肠组织中ROR-γt的表达以抑制Th17细胞分化。