【摘 要】
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在过去几十年里,由于食用被有害细菌污染的食品而引起的食源性疾病案例急剧增加。因此,对食源性致病菌的检测已成为认识和预防与食品安全和公众健康相关问题的重要因素。金黄色葡萄球菌是最常见的食源性致病菌之一,在世界范围内被认为是引起食源性疾病的主要原因。因此,开发能够平衡快速、高灵敏度、高特异性、高通量化、现场化等诸多特点的新型食品安全检测体系迫在眉睫。本研究以金黄色葡萄球菌为模式菌,利用本实验构建的CR
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在过去几十年里,由于食用被有害细菌污染的食品而引起的食源性疾病案例急剧增加。因此,对食源性致病菌的检测已成为认识和预防与食品安全和公众健康相关问题的重要因素。金黄色葡萄球菌是最常见的食源性致病菌之一,在世界范围内被认为是引起食源性疾病的主要原因。因此,开发能够平衡快速、高灵敏度、高特异性、高通量化、现场化等诸多特点的新型食品安全检测体系迫在眉睫。本研究以金黄色葡萄球菌为模式菌,利用本实验构建的CRISPR-Cas12a检测平台,通过金黄色葡萄球菌基因组的提取,PCR特异性扩增,荧光检测三个步骤,成功对金黄色葡萄球菌进行了准确定量。且整个流程检测时间少于2小时。该平台成功检测到低至10~3CFU/m L的金黄色葡萄球菌基因组DNA(g DNA),检测范围为10~3至10~7CFU/m L(R~2=0.99)。用CRISPR-Cas12a检测其他8种生物基因组,几乎不会释放荧光,证明检测具有良好的特异性。本研究分别使用生化培养法和CRISPR-Cas12a检测平台对牛奶样品中的金黄色葡萄球菌进行检测,结果发现两种检测结果几乎一致。但是相比于生化培养法,CRISPR-Cas12a检测平台具有检测时间短且检测成本低的优势。总之,这种新型生物传感器综合了灵敏度高、特异性强以及检测时间短等诸多优势,为利用CRISPR-Cas12a系统检测食源性致病菌提供了一个范例,同时该技术不仅扩展CRISPR-Cas系统在生物传感领域的应用范围,而且为细菌传感提供了一种理想的敏感性、特异性和简便性的通用技术。
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