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植物次生代谢物(Plant secondary metabolites)白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种植物保护素(Phytoalexin),对病原菌有防御作用。该化合物是一种抗氧化剂,具有抗癌、抗炎、预防心血管疾病等保健功能。但自然界中存在的Res量比较少,因此利用生物技术合成Res成为必然。白藜芦醇合酶(Resveratrol synthase,RS)是Res生物合成中的关键酶,将RS基因置于草莓果实特异性启动子RJ39的调控下转化草莓,从而提高其抗性及营养品质。本论文的具体工作如下:1、根据NCBI上已登录的RS基因的保守区域设计短片段的引物,采用PCR方法,分别从蛇葡萄(Ampelopsis aconitifolia)、川鄂爬山虎(Parthenocissus henryana)、五叶爬山虎(P.quinquefolia)、三叶爬山虎(P.himalayana)、桑树(Morus alba L.)、葎草(Humulus scandens)、花生(Arachis hypogaea)DNA中克隆了RS基因片段(635bp),测序结果显示这七个片段中不含有内含子,它们分别编码211个氨基酸。2、根据葡萄RS基因的开放阅读框(ORF)设计引物,采用RT-PCR方法,从葡萄科植物川鄂爬山虎(Parthenocissus henryana)总RNA中克隆了RS全长序列(1.179kb),其编码392个氨基酸。3、利用PCR方法,从草莓基因组中克隆了果实特异性启动子RJ39,序列全长860bp。通过在线分析软件PlantCare分析,该序列具有TATA-box、CAAT-box、G-box和I-box等功能域,具有典型的果实特异性启动子特征。4、把克隆的RS基因置于草莓果实特异性启动子RJ39的调控下,用除草剂抗性基因(bar)做选择标记,构建了植物表达载体pCAMBIA3300-RJ39-RS-Tnos,通过农杆菌介导的叶盘法转化草莓(Fragaia ananassa)。经过PCR和Southern印记杂交鉴定该基因已经转化到草莓植株中。