尿液中氯胺酮及其代谢物快速分离分析方法研究

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随着新型毒品在我国的快速蔓延,氯胺酮越来越多地出现在新型毒品吸食案件中,其测定和分离富集方法研究得到广泛关注,但国内对于氯胺酮及其代谢物的分析还多集中在医疗过程中血药浓度的监测研究上,在法庭科学范畴的研究是于近年才陆续开展起来,而且研究多集中于血液和毛发检材,对于尿液的检测还研究较少。而尿液中氯胺酮及其代谢物的快速分析检测对于从打击吸食新型毒品违法活动、从源头上遏制新型毒品的泛滥确实具有重要的意义。 本论文的目的是建立尿液中氯胺酮及其代谢产物的快速测定和分离富集方法包括研制其分离富集新材料。论文在系统总结了氯胺酮及其代谢产物的提取分离与检测方法基础上,选择了GC-MS作为测定手段,首先优化得到了GC-MS的分离和测定条件,然后建立了一个用于尿液中氯胺酮及其代谢产物的液.液萃取方法和GC-MS测定时的柱前衍生方法。论文还采用分子印迹技术合成了首次合成了氯胺酮的分子印迹聚合物作为氯胺酮的分离富集新材料,研究工作结果令人满意,具体内容如下: 一、优化得到了气相色谱.质谱联用技术分离测定氯胺酮和去甲氯胺酮的条件,使氯胺酮和去甲氯胺酮这一对难分离物质对在8min内达到了完全分离,用该方法得到的色谱峰的保留时间和峰面积重现性好,具有实际应用价值。 二、运用气-质联用仪(GC-MS)作为检测手段,对人尿中氯胺酮和去甲氯胺酮的液-液提取分离条件如萃取剂种类、酸度、盐析剂、萃取剂用量等进行了系统优化,建立了尿液中氯胺酮及其代谢物的同时提取分离方法。结果表明,在选定的萃取条件下,乙醚和苯两种溶剂都能有效提取氯胺酮及其代谢物,萃取回收率均在80.0%以上,其中以苯作为萃取溶剂时,方法的回收率受酸度影响小,在pH1-14范围内对氯胺酮及去甲氯胺酮均能有效提取,因此在分析方向不明确时,苯可以作为首选溶剂使用;而以乙醚作为萃取溶剂只能在碱性条件下萃取,但因为乙醚挥发快、毒性相对低,因此适宜作为快速分析时的萃取溶剂。实验结果还表明,以乙醚作为萃取剂对尿液样品进行处理后,可以大大降低GC-MS测定时的检测下限,用S/N=10表示的在全扫描和选择离子检测方式下的氯胺酮的检出限分别为1.0μg/mL和0.5μg/mL,去甲氯胺酮的检出限分别为1.5μg/mL和0.8μg/L。运用所建立的液.液萃取方法对实际案件进行分析后发现,经过本萃取方法处理的摄取时间较长的尿液,虽然没有检测到氯胺酮原体(K),有的样品甚至也未能检测到去甲氯胺酮(NK)和去氢去甲氯胺酮(DHNK),但是可检测到脱氢去甲去氨羟化氯胺酮(DHDANK)。这一结果提示:DHDANK可作为摄取时间较长的尿液中而不能检测到K、NK和DHNK时的另一个代谢物证据,这对迁延时间较长,无法检出氯胺酮和去甲氯胺酮的案件的分析具有较大意义。此外,所建立的提取方法还能从尿液中同时提取其它滥用药物如甲基苯丙胺(MA),苯丙胺(AM)、3,4-二甲氧基苯丙胺(MDA)、3,4-二甲氧基甲基苯丙胺(MDMA)等,因此可在一次分析中实现多种新型毒品及其代谢物的同时检测。该方法的另一个优点是需要溶剂量少,1.0mL样品可以用0.5mL溶剂有效提取,克服了传统液.液萃取使用较大体积萃取溶剂对环境造成污染这一缺点。 三、根据氯胺酮和去甲氯胺酮的结构,筛选了较为经济、方便实用和效果较好的乙酰化、丙酰化和二氯乙酰化试剂,并根据所筛选得到的衍生化试剂的特性研究了衍生化时间、温度、溶剂、衍生试剂用量对于衍生化的影响。研究发现丙酰衍生化对于分析物尤其是去甲氯胺酮的色谱行为有明显改善;二氯乙酰衍生化可在室温下5min完成,条件温和,操作极为简单,衍生结束后用氢氧化钠分解剩余的衍生化试剂,环己烷提取富集后即可进行分析,特别适用于吸毒人员的快速检测。实验还根据GC-MS的特点找到了衍生物的特征离子,采用分时选择离子监测方法去除了尿液基质的干扰,使检测限降低了1-2个数量级,氯胺酮丙酰化产物全扫描方式的检测限为0.05μg/mL,SIM方式的检测限为0.001μg/mL;去甲氯胺酮丙酰化产物全扫描方式的检测限为0.05μg/mL,SIM方式的检测限为0.001μg/mL,实现了尿液中低浓度氯胺酮及其代谢物的快速分析。 四、采用分子模板技术,以本体聚合和热引发方式制备了两个氯胺酮分子模板聚合物,并用紫外光谱法和平衡吸附法研究了聚合物的吸附性质。结果表明,所制备印迹聚合物对模板分子的结合具有两类结合位点,且在选用的两种功能单体中,以MAA制备的印迹聚合物MTP(MAA)比以AM制备的印迹聚合物MTP(AM)在吸收容量、印迹效果和识别选择性方面更具优势。MTP(MAA)对氯胺酮的吸附容量(Q)为28.98mg/g,印迹效果(Q<,MTP>/Q<,NMTP>)达到了3.35,且在2.5h内就基本达到了吸附平衡,说明该印迹聚合物有作为氯胺酮分离富集材料的应用前景。
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