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目的制备鱼藤酮(Rotenone,Rot)刺激人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)体外模型,探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)上清液对PD细胞模型内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激的影响。方法PD细胞模型制备:SH-SY5Y细胞置于内含10%(体积分数)灭活胎牛血清、1%双抗的DMEM/F12培养基中,在37℃、5%(体积分数)CO2恒温箱中培养,每2天换液1次,待细胞长满培养瓶底的80%-90%时,按1:3进行传代培养。设0μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L浓度的鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞24h,采用CCK-8法检测不同浓度Rot下的细胞活力,Annexin-V/PI染色、流式细胞仪检测不同浓度Rot的细胞凋亡及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度Rot刺激SH-SY5Y细胞的αSyn表达水平,结果用Image J进行条带灰度分析,且以αSyn蛋白与β-actin的比值作为结果分析。采用酶消化法从脐带中分离提取细胞,继续培养、传代。在倒置相差显微镜下观察hUC-MSCs形态,流式细胞仪鉴定,选取第三代细胞进行饥饿培养48h后收集上清备用。实验分组:Control组为溶剂对照组、Rot组为1.0μmol/L的Rot处理SH-SY5Y细胞、MSCs组为hUC-MSCs上清处理SH-SY5Y细胞组、MSCs+Rot组为hUC-MSCs上清+1.0μmol/L的Rot共同处理SH-SY5Y细胞组,每组SH-SY5Y培养24h后进行不同的实验研究。采用CCK-8法检测不同实验组的细胞活力、Annexin-V/PI染色,流式细胞仪检测不同实验组的细胞凋亡;Western blot检测各实验组αSyn、GRP-78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12和Caspase3表达水平,结果用Image J进行条带灰度分析,以目的蛋白与内参的比作为结果分析。统计学分析:实验数据均采用均数±标准差(x?s)表示,应用SPSS22.0统计软件对所得数据进行单因素方差分析(ANOVA),采用Tukey法做两两比较;两组间比较采用两独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1经0.1、1.0、5.0μmol/L的Rot处理SH-SY5Y细胞24h后细胞活力发生呈量效依赖性降低,与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);SH-SY5Y细胞凋亡率随鱼藤酮浓度增高而增加,1.0、5.0μmol/L的Rot组与空白对照自相比,差异有统计学意义(P<0.05);αSyn的表达水平随Rot浓度升高而增多,1.0、5.0μmol/L的Rot组与空白对照自相比,差异有统计学意义(P<0.05)。2在倒置相差显微镜下:第2代hUC-MSCs的细胞形态呈梭形,大致为漩涡状的排列。3流式细胞仪检测hUC-MSCs表型:间充质干细胞表达的CD73-APC(99.9%)、CD90-FITC(99.8%)和CD105-APC(98.5%);不表达造血细胞标记的HLA-DR-FITC(0.1%)、CD45-FITC(0.1%)、CD34-FITC(0.0%)、CD11b-FITC(0.0%)和CD19-FITC(0.0%)。4 hUC-MSCs-CM表达GDNF、NGF、BDNF神经营养因子,其中48h的GDNF和BDNF较24h表达明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。5 hUC-MSCs-CM+Rot共刺激SH-SY5Y较Rot单独刺激时细胞活力升高、细胞凋亡率减少、α-synuclein的表达水平减少(P<0.05);hUC-MSCs-CM和Rot共刺激组较Rot单独刺激组SH-SY5Y细胞低表达GRP-78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12、Caspase3(P<0.05)。结论1 hUC-MSCs-CM干预能够保护鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡。2hUC-MSCs-CM干预可以减轻鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞的帕金森病模型的内质网应激,可能是hUC-MSCs移植治疗PD的机制之一。图18幅;表14个;参67篇。