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目的：建立实时荧光定量PCR法联合多标志物细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)、乳珠蛋白(human mammaglobin, hMAM)、小粘蛋白(small breast epithelial mucin, SBEM)检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumour cells, CTC)的方法学平台,研究可手术乳腺癌患者(Ⅰ-Ⅲ期)外周血CTC的检出率、可手术乳腺癌患者外周血CTC的检出与原发肿瘤临床病理学特征的关系、系统辅助化疗对可手术乳腺癌患者外周血CTC的影响、不同化疗方案对CTC状态改变的影响。方法：运用实时荧光定量PCR法对40例对照组人群(20例健康志愿者和20例乳腺良性疾病患者)外周血中CK19-mRNA、hMAM-mRNA、SBEM-mRNA的表达进行检测以确定CK19-mRNA、hMAM-mRNA、SBEM-mRNA在正常外周血中的基线表达水平并建立阳性切点阈值；检测94例可手术乳腺癌患者外周血中CK19-mRNA、hMAM-mRNA、SBEM-mRNA的表达情况,任一标志物阳性为CTC阳性,计算94例可手术乳腺癌患者外周血CTC的检出率；分析CTC的检出与原发灶临床病理学特征的关系；对接受系统辅助化疗的72例可手术乳腺癌患者于化疗前、化疗三周期后、化疗结束后动态抽血取样监测CTC的变化,分析系统辅助化疗对可手术乳腺癌患者外周血CTC的影响；比较不同化疗方案对CTC影响的差异。结果：40例对照组人群外周血中CK19-mRNA、hMAM-mRNA、SBEM-mRNA的平均相对基因表达(relative gene expression, RGE)分别为1.16、1.88、1.26,阳性切点阈值为3.77、6.62、3.27,40例对照组人群外周血CTC检出率为5%(2/40)；94例可手术乳腺癌患者外周血中CK19-mRNA、hMAM-mRNA、 SBEM-mRNA的平均RGE为7.37、62.58、2.11,阳性率为49%(46/94)、34%(32/94)、13%(12/94),94例可手术乳腺癌患者外周血CTC检出率为56%(53/94)；可手术乳腺癌患者外周血CTC的检出与年龄、绝经状态、肿块大小、淋巴结转移、临床分期、病理分级、激素受体、人表皮生长因子受体2(human epithelial growth factor receptor2, HER2)无统计学关联(P>0.05)；72例接受辅助化疗的可手术乳腺癌患者中47%(18/38)经过三个疗程化疗之后CTC由阳性转为阴性,另有2例于化疗结束后转为阴性；FEC方案及T/EC方案患者各有46%(12/26)、67%(8/12)于化疗结束后CTC由阳性转为阴性。结论：实时荧光定量PCR法联合多标志物(CK19、hMAM、SBEM)检测乳腺癌外周血CTC的方法学平台敏感性及特异性好；可手术乳腺癌患者外周血CTC的检出率高；CTC的检出与原发肿瘤临床病理学特征无显著关联；系统辅助化疗对可手术乳腺癌外周血CTC的状态有显著影响；不同化疗方案对CTC的影响无显著不同。