帕金森病（PD）是由英国医生詹姆斯·帕金森在1817年第一个描述的，并且是神经退行性疾病之中仅次于阿尔茨海默病（AD）的常见疾病。PD在65岁及其以上的人口中约占2％。PD的临床症状包括静止性震颤，运动迟缓，肌僵直和姿势异常，主要病理特征是黑质致密部多巴胺（DA）能神经元不可逆性的退行性变。以前有研究表明，当PD的症状出现时，黑质中DA能神经元已经至少有50％发生退变，并且伴随纹状体中DA含量80％损耗。目前对于引起黑质中DA能神经元选择性退行性变的原因还不是很清楚。目前主要的假说有氧化应激和线粒体功能障碍等。因此如果能有某种药物可以减少细胞内过多氧化物的产生或者可以抑制线粒体功能障碍，将有可能成为治疗PD的新药物。MPTP是一种可以在人类和许多动物实验中诱导产生帕金森病症状的一种神经毒素。它的毒性主要体现在影响细胞内能量的消耗和自由基的产生。MPTP可由MAO-B转换为它的代谢产物MPP+。MPP+通过高亲和力的DA转运体被选择性的转运到细胞内，并且被DA能神经元内的线粒体吸收，最终通过抑制线粒体电子传递复合物I，破坏细胞内氧化磷酸化过程，导致ATP产生的减少，细胞内钙水平升高，以及自由基的产生，从而表现出DA能神经毒性。因此认为MPTP或MPP+模型是研究PD的经典模型。红景天，属于景天科红景天属的植物，是一种在东欧和亚洲民间医疗系统被广泛应用的的植物药。包含有超过20多种活性成分，如有机酸、黄酮类、鞣质和酚甙。有研究表明，红景天具有一系列的药理特性，包括抗衰老、抗氧化、抗炎、抗疲劳、抗抑郁等活性。红景天苷（Salidroside，Sal），是由红景天的根茎中提取出来的主要活性成分之一。以前的研究表明，Sal具有抗氧化、抗衰老，以及神经保护等作用。我们以前的研究表明，Sal具有抵抗MPP+诱导PC12细胞凋亡的作用。而且进一步研究，我们还发现Sal是通过抑制ROS-NO途径发挥的神经保护作用。本次研究的目的主要是观察Sal是否是通过抑制ROS-NO相关的线粒体途径在体外和体内发挥神经保护作用。目的:1.建立MPP+诱导的PD细胞模型，筛选出MPP+诱导PC12细胞凋亡的有效浓度和Sal对MPP+诱导PD细胞模型的有效保护浓度。2.观察Sal对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响；探讨Sal抑制MPP+诱导PC12细胞凋亡的相关机制。3.建立MPTP诱导的PD小鼠模型,观察Sal对MPTP诱导的PD小鼠模型行为学、形态学的影响。4.探讨Sal是否是通过ROS-NO相关的线粒体通路发挥神经保护作用。方法:1.设立空白对照组，100,200,300,400,500,600,700μmol/LMPP+浓度组,加入到PC12细胞之中，经过24h处理后，筛选MPP+实验处理有效浓度，筛选出MPP+有效浓度为500μmol/L；设立正常组，单独Sal组，MPP+处理组，不同剂量Sal预处理组（10，50,100μmol/L），用MTT法检测细胞活力；Hoechst33258，FCM分别检测细胞凋亡情况；通过全自动荧光酶标仪检测细胞内ROS和NO水平；通过Western Blot法检测细胞中Bcl-2, Bax, Cytochrom-c, Smac, Caspase-3,-6,-9,α-synuclein表达水平。2.实验动物的分组与造模：随机分为5组（每组10只）：正常组，腹腔注射生理盐水0.1ml/次，1次/d，连续14d；单纯Sal组，腹腔注射Sal45mg/kg，1次/d，连续14d；模型组，腹腔注射MPTP30mg/kg，1次/d，连续7d，7d后腹腔注射等体积生理盐水，1次/d，连续7d；不同剂量的Sal干预组，首先给予Sal15mg/kg或45mg/kg，1h后分别腹腔注射MPTP30mg/kg，1次/d，连续7d，随后7d停止注射MPTP，只给予腹腔注射Sal15mg/kg或45mg/kg。根据实验设计处理结束后，爬杆实验观察小鼠行为学变化。行为学检测完毕后，采用免疫荧光方法观察Sal对MPTP诱导的DA能神经元的影响。全波段自动酶标仪检测黑质部ROS和NO水平。Western Blot检测黑质部Bcl-2, Bax, Cytochrom-c, Smac,caspase-3,-6,-9, α-synuclein表达水平。结果:1. MTT比色法检测，观察500μM MPP+处理24h后，与对照组比较细胞活力显著下降（53.7±1.7％，P <0.01）。用不同浓度的Sal（10，50，100μM）预处理24h之后，再加入MPP+，与MPP+单独（53.7±1.7％）处理的细胞组比较，预处理Sal可以显著减少MPP+诱导的细胞活力下降的水平，10，50，和100μM Sal预处理后，细胞活力分别恢复至61.1±1.7％（P <0.05），73.5±1.4％（P <0.05），85.1±2.1％（P <0.01）。2. Hoechst33258染色后，正常细胞核显示均匀蓝染，边缘整齐，500μM MPP+24h处理后该组细胞核呈致密浓染，皱缩，甚至可见核碎裂。但是用不同剂量的Sal预处理后，细胞凋亡明显减轻。而单独运用Sal对核形态无明显影响。3. FCM结果显示，500μM MPP+处理24h后凋亡细胞的百分比从2.56±0.23%（对照组）增加至47.54±1.23%（P <0.01）。而在Sal10,50,100μM预处理后，细胞凋亡的比例分别降至32.13±1.75%,25.32±2.21%,和10.36±1.12%。而Sal单独处理对细胞凋亡无明显影响（2.87±0.14%）。4.全自动荧光酶标仪检测ROS和NO的变化水平，500μM MPP+处理PC12细胞后，与对照组比较ROS/NO的水平显著增强（P <0.01）。而Sal预处理，可显著减低细胞内ROS/NO的水平，且具有剂量依赖性。与未处理组相比，10，50，和100μMSal预处理后，ROS峰值降分别低至3.7倍，2.3倍，1.5倍，NO峰值降分别低至3.2倍，2.1倍，1.4倍。而单纯的Sal处理对细胞内ROS/NO影响不明显。5. Western Blot方法检测结果表明，与500μM MPP+处理组比较，Sal预处理可以提高Bcl-2/Bax比值，减少Cyt-c，Smac释放，抑制Caspase-3,-6,-9的激活和α-syn的聚集。而单纯的Sal处理对细胞内这些蛋白的表达无显著性影响。6.爬杆实验结果检测显示，与空白对照组小鼠相比, MPTP模型组小鼠运动协调能力明显下降，表现为小鼠从杆上趴下来的时间（TLA）和小鼠头完全转向下方的时间（Tturn）均明显增加（P <0.01）。在用Sal治疗后，小鼠的运动协调能力明显改善,爬杆时间缩短，且呈剂量依赖性（P <0.05，P <0.01）。免疫荧光染色结果显示：与空白对照组相比，模型组小鼠TH阳性细胞数目明显减少(P <0.01)，而受到15mg/kg和45mg/kg Sal处理后，TH阳性细胞数明显高于MPTP处理组（P <0.05，P <0.01）。此外，单独应用Sal处理的小鼠，与对照组相比，黑质TH阳性细胞数目无明显变化。7.全波段自动荧光酶标仪检测ROS和NO结果显示，与空白对照组内ROS/NO水平相比，模型组中MPTP可诱导黑质内ROS/NO水平上升至1.4/1.3倍（P <0.01）。然而，Sal预处理可以显著抑制MPTP诱导的ROS/NO增加，而Sal单独处理对黑质细胞内ROS/NO水平无影响。8. Western Blot方法检测结果表明，与30mg/kg MPTP处理组比较，Sal预处理可以显著提高Bcl-2/Bax比值，减少Cyt-c，Smac释放，抑制Caspase-3,-6,-9的激活和α-syn的聚集。而单纯的Sal处理对黑质内这些蛋白的表达无显著性影响.结论:1. Sal可明显抑制MPP+诱导PC12细胞的凋亡,并且对MPTP诱导的PD小鼠模型具有神经保护作用。2. Sal对PD多巴胺能神经元的保护作用可能和其调节ROS-NO相关的线粒体通路有关。