【摘 要】
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本研究从健康条斑紫菜上分离的优势菌株中筛选出了一株具有较强抑菌活性的紫菜藻际细菌NPyS3，经过对该菌株的形态特征分析，生理生化特征分析及16S rRNA基因序列的同源性比较，鉴定并命名该菌株NPyS3为紫菜假交替单胞菌（Pseudoalteromonas porphyrae）。 以P. porphyrae为标准菌株，根据该菌16S rRNA基因序列高度保守区设计了两对特异性引物，一对为假交
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本研究从健康条斑紫菜上分离的优势菌株中筛选出了一株具有较强抑菌活性的紫菜藻际细菌NPyS3，经过对该菌株的形态特征分析，生理生化特征分析及16S rRNA基因序列的同源性比较，鉴定并命名该菌株NPyS3为紫菜假交替单胞菌（Pseudoalteromonas porphyrae）。 以P. porphyrae为标准菌株，根据该菌16S rRNA基因序列高度保守区设计了两对特异性引物，一对为假交替单胞菌属特异性引物，另一对为细菌通用的特异性引物，运用Real-Time PCR方法，对紫菜藻际微生物进行了定性定量检测。以其他25株紫菜藻际细菌为对照验证这两对引物的特异性。结果表明，假交替单胞菌属特异性引物仅对含有假交替单胞菌DNA模板的样品有扩增，其他菌没有检测到扩增信号；细菌通用的特异性引物对含有这25株紫菜藻际细菌DNA模板的样品都有扩增。以P. porphyrae的16S rDNA扩增后回收后所得DNA片段作为建立荧光定量PCR标准曲线的标准品，该方法对假交替单胞菌属的检测范围为7.74×10~1~7.74×10~5个基因拷贝/μL （R~2=0.999）；总细菌检测范围为7.74×10~1~7.74×10~6个基因拷贝/μL （R2=0.998）。对野外采集的紫菜藻际细菌DNA样品进行检测，都能获得扩增信号。利用该方法建立的标准曲线来创建一种新的相对定量的方法来检测标准菌株的生长曲线，结果与传统OD600nm吸光值获得的结果不一致；利用该方法对在实验室条件下初步模拟现场样品进行定量检测，结果可以很好的反应紫菜生长过程中紫菜藻际细菌的动态变化状况；利用该方法检测环境样品中假交替单胞菌，并以环境样本中假交替单胞菌与总细菌的比值反映其细菌丰度，结果表明与传统的分离纯化方法相比，该方法能快速、高效、准确的检测环境样品中的假交替单胞菌，而且可以检测到传统培养方法不能培养或是未发现的菌，初步证明所建立的方法可有效定量假交替单胞菌在环境样本中的丰度。因此，实时定量PCR技术在检测紫菜藻际微生物方面具有较高的潜在应用价值。
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