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第一部分：循环内皮祖细胞在非霍奇金淋巴瘤血管形成中的作用目的：建立一种体外培养原代内皮祖细胞的分离培养及鉴定方法；同时研究该细胞在非霍奇金淋巴瘤血管形成中的作用。方法：以人脐血中单个核细胞为来源,利用EGM-2MV培养基在体外诱导培养并扩增内皮祖细胞；应用细胞功能试验,细胞表面标志鉴定内皮祖细胞；建立裸鼠非霍奇金淋巴瘤皮下移植瘤模型,尾静脉给予GFP标记的内皮祖细胞,了解内皮祖细胞在淋巴瘤血管中募集及其定位特征；采用共培养技术,了解内皮祖细胞与成熟内皮细胞共同培养后血管形成能力的变化。结果：分离培养人脐血单个核细胞后1周,细胞间可出现以克隆形式生长的不规则细胞,培养第3周末细胞克隆扩大融合,呈现典型的铺路石样表现；提纯分类该类细胞,发现其具有摄取ac-LDL及与UEA-1结合的内皮细胞能力；流式细胞仪检测细胞表面标志发现该类细胞可逐渐获得内皮细胞表面标志,干细胞表面标志逐渐消失；与成熟内皮细胞相比,该细胞具有更强的成管能力,鉴定该类细胞为原代内皮祖细胞。内皮祖细胞经尾静脉外源性注射入裸鼠体内后,在注射后第3天,10天时间点观察裸鼠非霍奇金淋巴瘤移植瘤瘤体切片内均可见GFP标记的内皮祖细胞,定位于血管周围,且注射后第10天裸鼠瘤体内血管形成更多；体外共培养内皮祖细胞及成熟内皮细胞,较单纯成熟内皮细胞及单纯内皮祖细胞培养显示出更强的成管及迁移能力。结论：1.利用脐血单个核细胞为来源,可以成功培养出原代内皮祖细胞；2.内皮祖细胞可被募集至淋巴瘤移植瘤瘤体内,参与其血管形成；同时随时间增加,内皮祖细胞可以促进淋巴瘤的血管形成；3.内皮祖细胞促进淋巴瘤血管形成可能是与成熟内皮细胞共同作用下促进细胞的迁移及成管能力来实现的。第二部分：淋巴瘤微环境激活HDAC7对内皮祖细胞血管形成能力的影响目的：研究淋巴瘤微环境通过HDAC7蛋白对内皮祖细胞血管形成能力的影响。方法：以内皮祖细胞为研究对象,利用非霍奇金淋巴瘤细胞上清为干预因素,应用成管实验研究淋巴瘤细胞上清对内皮祖细胞血管形成能力的影响；同时应用免疫印迹技术检测淋巴瘤细胞上清对内皮祖细胞中HDAC7蛋白表达的作用；利用siRNA技术沉默内皮祖细胞内HDAC7基因,研究沉默HDAC7基因后对内皮祖细胞成管及迁移能力的影响。结果：淋巴瘤细胞上清及VEGF细胞因子干预内皮祖细胞后,可促进其成管能力,同时激活HDAC7蛋白的磷酸化。沉默内皮祖细胞内的HDAC7基因后,内皮祖细胞的成管能力减弱,单位时间内迁移能力下降。结论：淋巴瘤微环境可能通过激活HDAC7蛋白促进内皮祖细胞的成管及迁移能力,从而增进细胞的血管形成能力。第三部分：VEGF-PKD1-HDAC7信号通路调控内皮祖细胞的机制研究目的：研究VEGF如何调控HDAC7信号,同时明确其可能激活的信号通路。方法：应用免疫印迹技术了解VEGF刺激下HDAC7及其上游蛋白的激活情况,免疫荧光技术检测VEGF作用下HDAC7的细胞内定位；同时应用VEGF下游激酶的特异性抑制剂分别抑制VEGF下游激酶的表达,免疫印迹技术及免疫荧光技术分别了解激酶作用下HDAC7的激活情况及细胞核浆转位情况的变化,从而了解VEGF是通过哪一条信号途径调节HDAC7的表达或定位变化。结果：VEGF作用于内皮祖细胞后,HDAC7出现磷酸化,其磷酸化在30-60min达到最大程度,随后随时间延长而减弱,同时VEGF还促进HDAC7的核浆转运活动,VEGF作用2h后HDAC7出核量达到最大程度；应用PKD1特异性抑制剂作用细胞后,HDAC7的磷酸化及核浆转位消失,而ERK及PI3K特异性抑制剂并不能抑制VEGF刺激下的HDAC7的磷酸化及转位。结论：1. VEGF可以通过激活蛋白磷酸化及核浆转位来调控HDAC7,从而促进内皮祖细胞参与的血管形成；2. VEGF调控HDAC7的活动主要通过下游激酶PKD1来介导,而与下游ERK,PI3K信号通路无关。