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目的:脊髓缺血再灌注损伤(Spinal Cord Ischemia-Reperfusion Injury,IR)是心外科胸腹部大血管术后的常见并发症,可引起神经细胞缺氧后延迟性死亡,导致术后暂时性的轻瘫或者截瘫,严重者还能造成永久瘫痪甚至死亡。本论文拟探索过表达长链非编码RNA TTN-AS1(Lnc RNA,long noncoding RNA)对IR的影响及其可能的分子机制。通过建立大鼠IR模型造成IR损伤,探究Lnc RNA TTN-AS1是否可以靶向调节mi R-300-3p基因,并研究改变大鼠脊髓内Lnc RNA TTN-AS1的表达对大鼠降主动脉阻断导致的IR产生的影响。研究方法:1、通过动脉阻断法(阻断远端降主动脉及锁骨下动脉15min)建立大鼠的IR动物模型,分别于术后2h、6h、12h、24h和48h五个时间点随机抽取5只大鼠,检测其脊髓组织中mi R-300-3p和ACTL6A(Actin Like 6A)的表达量;2、对Lnc RNA TTN-AS1、mi R-300-3p和ACTL6A分别进行双荧光素酶实验检测互相之间是否存在直接靶向关系;3、将100只雄性SD大鼠随机分为5组:(1)假手术组(Sham组):大鼠只接受开胸手术,不行动脉阻断操作(n=20);(2)对照组(Control组):提前一天将PBS(10ul)通过鞘内注射至大鼠脊髓,行开胸手术并阻断大鼠降主动脉及左锁骨下动脉15min(n=20);(3)Antagomi R-300-3p组:通过鞘内注射Antagomi R-300-3p(5nmol,10ul)预处理大鼠,观察12小时无异常后纳入研究。2天后行开胸手术,阻断大鼠降主动脉及左锁骨下动脉15min(n=20);(4)Vector-Lnc RNA组:通过鞘内注射过表达TTN-AS1慢病毒空载(1×10~8TU,10ul)预处理大鼠,观察12小时无异常后纳入研究。10天后行开胸手术,阻断大鼠降主动脉及左锁骨下动脉15min(n=20);(5)Lnc RNA TTN-AS1组:通过鞘内注射过表达TTN-AS1慢病毒载体(1×10~8TU,10ul)预处理大鼠,观察12小时后无异常后纳入研究。10天后行开胸手术,阻断大鼠降主动脉及左锁骨下动脉15min(n=20)。4、在IR术后24h、48h、3d、1w对各组大鼠(n=5/时间点)进行后肢运动功能评分(motor deficit index,MDI)。5、将IR术后24h的各组大鼠处死,取出脊髓组织样本,应用RT-q PCR检测mi R-300-3p和ACTL6A的表达量;Western blot检测ACTL6A和凋亡相关蛋白的表达量。对脊髓组织切片进行Nissl染色和TUNEL法凋亡检测实验。结果:1、mi R-300-3p的表达水平分别在IR后6h、12h、24h和48h时出现升高,约24h时达到峰值(P<0.01);ACTL6A的m RNA表达水平分别在IR后6h、12h、24h和48h时出现降低,24h时达到最低(P<0.01);2、双荧光素酶实验证实了Lnc RNA TTN-AS1对mi R-300-3p存在负向调控关系;mi R-300-3p对ACTL6A存在负向调控关系;3、各组大鼠体重、肠温均无明显差异;与Sham组相比,各缺血组大鼠的近端平均动脉压(Proximal Mean Arterial Pressure,PMAP)和远端平均动脉压(Distal Mean Arterial Pressure,DMAP)明显降低(P<0.05);4、MDI评价:IR组与Sham组大鼠相比在术后24h、48h、3d、1w的MDI评分升高(P<0.05),而Lnc RNA TTN-AS1组和Antagomi R-300-3p组与Control组大鼠相比在术后24h、48h、3d、1w的MDI评分降低(P<0.05);5、RT-q PCR结果显示与Sham组相比,Control组大鼠脊髓组织mi R-300-3p在IR术后24h表达明显升高(P<0.05),ACTL6A表达明显降低(P<0.05);6、Western blot结果显示Control组相比,Lnc RNA TTN-AS1组和Antagomi R-300-3p组大鼠脊髓中ACTL6A的蛋白表达水平升高;促凋亡相关蛋白PTEN、Bim及Bax的蛋白表达水平降低;抗凋亡相关蛋白Bcl-2的蛋白表达水平升高。7、组织学检查:Nissl染色结果显示,Lnc RNA TTN-AS1组与Antagomi R-300-3p组大鼠脊髓组织内存活神经元数量较Control组增多(P<0.05);TUNEL染色结果显示Lnc RNA TTN-AS1组与Antagomi R-300-3p组大鼠脊髓组织内凋亡神经元数量较Control组减少(P<0.05);结论:过表达Lnc RNA TTN-AS1可以靶向结合mi R-300-3p导致其抑制ACTL6A表达的作用被削弱,减少了IR后大鼠神经元的凋亡并提高其存活率,减轻缺血再灌注损伤,从而保护IR后的运动功能。