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目的1、在“三套管”法的基础上，建立大鼠左肺原位移植的最佳模型，为进一步研究诱导大鼠肺移植术后免疫耐受状态提供动物模型。2、建立大鼠骨髓源性树突状细胞（DC)的体外培养和扩增方法，并通过脂质体转染质粒sTNFRI-IgGFc基因，观察、测定DC细胞的生物学特性。3、探讨sTNFRI-IgGFc基因修饰的树突状细胞诱导大鼠肺移植术后免疫耐受的可能机制。方法1、外科显微放大镜下采用“三套管法”完成大鼠同种异体左肺原位移植模型，通过手术成功率、手术时间、病理学改变等指标评估模型的可行性。2、利用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rrGM-CSF）和重组大鼠白细胞介素-4（rrIL-4）诱导Wistar大鼠骨髓细胞分化成为DC细胞，于培养第5天收集细胞分组，并行脂质体介导的质粒sTNFRI-IgGFc基因转染，第7d加入LPS刺激。第9天行DC细胞形态学鉴定和功能测定。包括形态观察、细胞免疫表型的流式细胞仪鉴定，通过制备负载供体抗原的受体DC细胞与受体脾脏T细胞性单向淋巴细胞反应，观察各组刺激T细胞增殖情况；最后采用酶联吸附试验（ELISA）测定细胞培养上清中细胞因子水平（sTNFRI、IL-12、TNF-α）的含量。3、将SD大鼠做为供体、Wistar大鼠做为受体。分为对照组、imDC组、sTNFRIIgGFc-DC组，每组20只大鼠，行10例左肺原位移植。每组分别注射100ulPBS、imDC（数量为1x106，悬于100ulPBS中）、100ul sTNFRIgGFc-DC（数量为1x106，悬于100ulPBS中），于术前7天、术前、术后7天共3次静脉注射。每组随机取5只大鼠于移植后第7天处死，做相关检测，包括受鼠脾脏T细胞的单向淋巴细胞反应、血清细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ、TNF-α)水平，剩余5只观察存活情况。结果1、完成大鼠左肺原位移植正式实验25例，20例存活，5例死亡，成功率80％。供肺灌洗到获取完成时间（10±1）min，体外套管时间（10±1）min，供受体动静脉和支气管吻合时间（40±2）min。对移植肺（n=5）行夹闭实验，阻断右侧肺门，单肺通气维持20min，大鼠心跳呼吸平稳。受鼠于术后7天内均存活2、所获得的DC细胞在光镜和电镜下均表现为DC的典型形态，流式细胞仪表型检测也为典型DC的特征。sTNFRIIgGFc-DC在细胞表型和MLR、细胞因子分泌上具有不成熟DC的特征；能分泌大量的sTNFRI，还能拮抗LPS的促熟作用。3、sTNFRIIgGFc-DC组刺激T细胞增殖能力弱于对照组和imDC组（p<0.05）,而IL-4、IL-10水平明显高于对照组和imDC组(p<0.05)，IL-2、IFN-γ水平低于前两组（p<0.05）；TNF-α含量基因转染组明显低于前两组(p<0.05)。在病理切片上，也可见sTNFRIIgGFc-DC组炎症反应轻。结论1、通过“三套管”法建立了稳定的大鼠左肺原位移植模型2、成功建立了大鼠骨髓源性DC细胞的体外培养和扩增，并通过脂质体转染质粒sTNFRI-IgGFc基因，制备了具有抗LPS成熟和高表达sTNFRI-IgGFc基因的能“致耐受”的DC细胞。3、sTNFRI-IgGFc基因修饰的树突状细胞能够诱导大鼠肺移植术后免疫耐受，延长移植物存活。可能的机制为sTNFRI-IgGFcDC细胞低表达的CD80、CD86，导致T细胞活化的第二信号缺失，产生免疫偏移有关，也可能和sTNFRI-IgGFc高效阻断、封闭受体体内TNF-α活性有关。