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目的:探讨黄芪汤逆转二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化的作用机制。
方法:4周12次腹腔注射0.5%DMN溶液(2ml/kg body wt.)制备大鼠肝纤维化模型,第5周开始随机分为模型对照组和黄芪汤组,用药至第6周末收集大鼠肝组织,Western印迹法分析肝组织Fas、Caspase8、Caspase9、CytC、Bcl-2、Caspase-3、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达;Realtime PCR法观察肝组织Bax、SMAmRNA表达;明胶酶图法检测肝组织MMP-2和MMP-9的活性。
结果:
1.Western blot结果显示:与正常组相比,大鼠肝组织Fas、Caspase8、Caspase9、CytC、Bcl-2、Caspase-3、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白表达均于造模后逐渐升高,4周时达到高峰(P<0.01);与6周模型组相比较相比,黄芪汤组大鼠肝组织Fas、Caspase8、Caspase9、Caspase-3、TGF-β1、TIMP-1、TIMP-2蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达也明显降低(P<0.05),CytC蛋白表达也有所下降,但无统计学意义,MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01)。2.Realtime PCR结果显示:与正常组相比,模型大鼠肝组织Bax、SMAmRNA表达量于造模后逐渐升高,4周时达到高峰(P<0.01);与6周模型组相比,黄芪汤组大鼠肝组织Bax、SMA mRNA表达量显著降低(P<0.01)。3.明胶酶图结果显示:与正常组相比,模型组大鼠肝组织MMP-2活性和MMP-9活性于造模后逐渐升高,4周时达到高峰(P<0.01);与6周模型组相比,黄芪汤组大鼠肝组织MMP-2活性显著降低(P<0.01),MMP-9活性显著升高(P<0.05)。
结论:
1.DMN致大鼠肝纤维化模型的病理机制:①肝细胞凋亡增加是肝纤维化进展的重要促动因素;②肝星状细胞活化是肝纤维化发生的重要环节;③MMPs/TIMPs失衡是肝纤维化发生的重要因素之一。
2.黄芪汤有效治疗DMN诱导的大鼠肝纤维化,提示气虚湿阻是本模型的主要中医病理学基础,其补气的作用特点主要表现在抗肝细胞凋亡及降解过度沉积的ECM。
3.黄芪汤治疗DMN诱导大鼠肝纤维化的作用机制:①抑制肝细胞凋亡;②抑制HSCs活化;③调控MMPs/TIMPs系统,促进ECM降解。